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树突状细胞(Dendritic Cells,DCs)是专职的抗原提呈细胞(Antigen Presenting Cells,APC),其在免疫应答的启动过程中发挥非常重要的作用。DCs的效应功能与其成熟的状态密切相关。未成熟的DCs具有很强的抗原加工能力,表达低水平的MHC Ⅱ类分子以及共刺激分子,其提呈抗原和诱导免疫应答的能力较弱。未成熟的DCs受到某些刺激(例如LPS)后逐渐成熟,抗原提呈和免疫激活作用加强,形成抗原肽-MHC Ⅱ类分子复合物为T细胞活化提供第一信号,同时还会高表达CD80、CD86、CD40等共刺激分子,为T细胞活化提供第二信号。蛋白质翻译后修饰在生命体中具有非常重要的作用,其中蛋白质的泛素化是一种常见的修饰方式,并且泛素化修饰在天然免疫细胞识别、清除病原体及细胞信号传导等过程中扮演重要的角色。SCF(SKP1-CUL1-F-box protein)E3泛素连接酶复合物由接头蛋白SKP1,骨架蛋白Cullin-1,底物识别亚基或者F-box蛋白以及RING组件RBX1或RBX2组成。FBXW7是SCF E3泛素连接酶复合物中F-box蛋白中的一员,之前发现仅在K48位发生泛素化随后降解靶蛋白,它在肿瘤的发生发展、脂类代谢、细胞增殖分化以及维持干细胞的稳态等一系列生命活动中均扮发挥重要的调控功能,本实验室前期研究发现FBXW7在炎症中也发挥调节作用,然而它是否调控树突状细胞的功能此前并未有人阐明。本课题的研究目的是观察髓系特异性敲除FBXW7基因后小鼠树突状细胞的成熟及其功能的变化。我们使用Cre-LoxP重组酶系统构建了髓系细胞中特异性敲除FBXW7基因的小鼠(Lysm+FBXW7fl/fl mice,FBXW7 KO),取小鼠的骨髓细胞在细胞因子GM-CSF以及IL-4的作用下,体外将骨髓前体细胞诱导形成骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-deriven dendritic cells,BMDCs)进行研究。结果发现,与WT小鼠相比,KO小鼠来源的BMDCs表面共刺激因子CD80、CD86以及MHCⅡ类分子的表达有明显的降低。RT-PCR检测发现,相比于WT小鼠,KO小鼠来源的BMDCs的IL-6、TNF-α、IL-12等炎症因子的mRNA表达水平明显下降而抗炎因子IL-10的mRNA表达水平显著上升。随后ELISA检测BMDCs培养上清中的IL-6、IL-10、TNF-α以及IL-1β分泌水平,发现除了 IL-1β没有明显变化外,其余结果与mRNA表达水平结果相一致。为了进一步探究DCs的效应功能,我们将BMDCs与OT-Ⅱ小鼠的脾细胞共培养后发现,WT小鼠来源的BMDCs能够活化更多的初始T细胞,说明KO小鼠的BMDCs的免疫激活功能减弱。最后我们检测了相关信号通路的变化,发现KO小鼠来源的BMDCs中NF-κB的活化降低而STAT3信号通路的活化显著升高,表明这两条信号通路可能参与FBXW7对DCs成熟和功能的调控。上述研究结果显示了E3泛素连接酶FBXW7对小鼠BMDCs的成熟及其效应功能有促进的作用,为进一步深入研究其机制建立了基础。