囊型棘球蚴病(Cystic echinococcosis,CE)是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)的幼虫棘球蚴引起的一种易被忽视的慢性人畜共患寄生虫病。该病严重危害人类健康,给畜牧业造成了巨大的经济损失。然而,由于对棘球蚴生长、发育、囊液的形成途径缺乏深入的认识,目前对棘球蚴病的防治一直缺乏创新的方法。本研究首先通过转录组测序技术(RNA-sequencing,RNA-seq)检测细粒棘球绦虫原头蚴(Protoscoleces,PSCs)体外培养不同发育时期的基因转录表达水平,筛选在原头蚴囊化形成棘球蚴过程中具有显著上调的差异表达基因进行KEGG、GO数据库富集分析。结果发现血管加压素调节的水重吸收代谢通路与囊液形成密切相关,而该通路主要是由蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)介导囊泡转运过程来运输水及小分子物质。然后,扩增EgPKA基因序列并利用生物信息学方法预测其理化性质,亚细胞定位,二、三级结构,抗原表位和密码子使用偏好性。结果表明,与NCBI参考序列相比,EgPKA编码区417-464 bp缺失48 bp,全长1053bp,编码350个氨基酸。通过序列比对分析发现突变后的EgPKA特征性保守区域并未改变,如ATP结合位点(GTGSFGRV)、丝/苏氨酸激活位点(RDLKPEN)、PKA调节亚基结合位点(LCGTPEY)。此外,EgPKA蛋白具有多个抗原表位及较好的免疫反应性。最后,克隆EgPKA基因,并在毕赤酵母中构建重组菌株GS115/pPIC9K-EgPKA,纯化目的蛋白后研究其与血清抗体的免疫反应性。结果显示重组菌株在1.0%甲醇浓度下培养72 h可获得最优蛋白产量;NI-NTA树脂纯化的目的蛋白与免疫血清有特异性反应。此外,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,QPCR)检测EgPKA基因转录表达水平,结果发现EgPKA在体外培养不同发育时间的原头蚴和在感染原头蚴的小鼠体内不同发育时间的棘球蚴囊壁组织中的表达趋势相同,均呈上升趋势。本研究首次报道细粒棘球绦虫原头蚴囊化形成棘球蚴过程中的转录组学信息;发现和验证了EgPKA编码区序列发生了基因缺失突变;成功构建EgPKA真核表达体系,诱导表达的重组蛋白具有较好的免疫反应性,有成为抗细粒棘球蚴病临床诊断抗原的潜在价值,本研究为棘球蚴液的形成机制奠定基础。