长链非编码RNA-HEIH在结直肠癌中的表达及其肿瘤生物学功能研究

来源 :南方医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bae2009
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目的:研究长链非编码RNA-HEIH(lncRNA-HEIH)在结直肠癌中的表达,并分析lncRNA-HEIH表达与结直肠癌患者临床病理参数及预后的相关性。进一步探讨lncRNA-HEIH对结直肠癌细胞的增殖、凋亡、细胞周期、迁移和侵袭能力的影响,初步揭示lncRNA-HEIH在结直肠癌发生发展中的作用,为结直肠癌的诊治提供新的思路。方法:1、选取84例结直肠癌患者的癌组织和癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测组织中lncRNA-HEIH的表达量,统计分析lncRNA-HEIH的表达水平与结直肠癌患者的临床病理参数的相关性,并通过电话回访的方式,绘制患者的生存曲线,分析lncRNA-HEIH与患者预后的关系。2、运用RT-PCR法检测lncRNA-HEIH在4种结直肠癌细胞株(HT-29,SW480,HCT116和LoVo)及正常结肠上皮细胞NCM460中的相对表达量,选取表达量最高的结直肠癌细胞(LoVo),通过脂质体转染技术抑制lncRNA-HEIH在LoVo细胞中的表达,并分为空白对照组lnc-NC和lncRNA-HEIH抑制剂组(lnc-HEIH-1和lnc-HEIH-2),RT-PCR法验证转染效果。3、细胞转染后,运用CCK-8法和流式细胞术分别检测LoVo细胞的增殖能力、凋亡率及细胞周期变化;运用细胞划痕实验和Transwell法检测LoVo细胞的迁移和侵袭能力。4、运用Western blot法检测LoVo细胞中凋亡相关蛋白Caspase3、Caspase9和Bcl-2表达的变化。结果:1、lncRNA-HEIH在结直肠癌组织中的相对表达量为11.98±5.54,显著高于癌旁正常组织中的相对表达量3.15±1.48,差异有统计学意义(P<0.01)。统计分析结果显示,结直肠癌患者癌组织中 lncRNA-HEIH的表达量与患者性别、年龄、肿瘤位置、分化程度和有无淋巴结转移无显著相关性(P均>0.05),而与肿瘤大小和TNM分期有显著相关性(P均<0.05)。生存曲线分析结果显示,lncRNA-HEIH高表达组患者的生存周期显著短于低表达组,差异有统计学意义(P<0.01),进一步多因素COX回归分析的结果表明,lncRNA-HEIH表达量、分化程度、TNM分期和有无淋巴结转移是结直肠癌患者的独立预后因子。2、lncRNA-HEIH在结直肠癌细胞系HT-29,SW480,HCT116和LoVo中的相对表达量分别为3.12±0.37,4.45±0.41,4.82±0.47,6.29±0.78,均显著高于正常结肠上皮细胞NCM460中的表达量(P均<0.01)。经脂质体转染后,lncRNA-HEIH在LoVo细胞中表达量显著降低,且lnc-HEIH-1组更低于lnc-HEIH-2组,差异有统计学意义(P<0.01)。3、与阴性对照组相比,lncRNA-HEIH抑制剂组的细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭能力均显著降低,差异有统计学意义(P均<0.05),而lncRNA-HEIH抑制剂组的细胞凋亡率显著性升高,同时细胞周期检测显示,lncRNA-HEIH被抑制后,阻滞在G2/M期的细胞明显升高(P<0.05)。4、lncRNA-HEIH受抑制后,结直肠癌细胞中Caspase3和Caspase9蛋白的表达量显著升高(P均<0.05)而Bcl-2的表达量显著降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:IncRNA-HEIH在结直肠癌中表达量显著上调,且其高表达与结直肠癌患者的肿瘤大小、TNM分期和不良预后显著相关,IncRNA-HEIH可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并抑制其细胞凋亡过程。
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