基于基因组DNA信息分析挖掘新型脂肪酶

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:hdzj999
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全细胞催化剂具有制备简单,回收容易、稳定性好等优点。基于基因组信息,挖掘新型脂肪酶,是当前寻找新酶的重要途径之一。分析已公布的Burkholderia cepacia J2315菌株全基因组信息,在其2号染色体上,有2个被预测为细胞结合脂肪酶的基因编码区。基于此信息,从本实验室自主分离的脂肪酶高产菌株Burkholderia sp. ZYB002基因组中,直接克隆了这两个预测为细胞结合脂肪酶基因,并实现了异源可溶性表达,初步分析了其基本酶学性质。具体实验结果如下:1、lipC24基因全长1317 bp,编码438个氨基酸残基;多肽链中具有保守五肽-G-Xi-S-X2-G-序列;lipC24基因的功能性表达依赖于伴侣蛋白LipB的共表达。重组蛋白LipC24的分子量为45 kDa;能有效水解各种对硝基苯酯,对中链脂肪酸的对硝基苯酯表现出偏爱性;其催化水解反应的最适温度为40℃,最适pH 7.5,40℃下的半衰期为15.72 min,在pH 7.0-8.0的条件下,具有较好的稳定性。三级结构模拟表明:Ser179, His367和Asp336个氨基酸残基形成活性中心的催化三联体;Gly180和Ala82为维持阴离子氧洞稳定的氨基酸残基。2、lipC21基因全长1287 bp,编码427个氨基酸残基;多肽链中具有保守五肽-G-X1-S-X2-G-序列;在GroES/EL伴侣蛋白的介导下,可获得可溶性表达的重组蛋白LipC21,分子量为45 kDa。但可溶性的重组蛋白LipC21,未能检测到酯解酶活性。
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