【摘 要】
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苹果（Malus×domestica）是我国栽培面积较广的果树。野生苹果资源具有晚花、适应性强、果实耐储等特点,开发其组培快繁和遗传转化体系对于进一步进行基因资源挖掘,为育种提供良好试材有重要意义。同时,建立现有主要栽培品种的组培快繁和遗传转化体系,能为进行遗传改良选育新品种奠定良好的基础。本文探究了‘红富士’（Malus×domestica‘Red Fuji’）、‘澳洲青苹’（Malus×dom
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苹果（Malus×domestica）是我国栽培面积较广的果树。野生苹果资源具有晚花、适应性强、果实耐储等特点,开发其组培快繁和遗传转化体系对于进一步进行基因资源挖掘,为育种提供良好试材有重要意义。同时,建立现有主要栽培品种的组培快繁和遗传转化体系,能为进行遗传改良选育新品种奠定良好的基础。本文探究了‘红富士’（Malus×domestica‘Red Fuji’）、‘澳洲青苹’（Malus×domestica‘Granny Smith’）和东方苹果（Malus orientalis）的组培及愈伤遗传转化体系,研究了不同浓度植物生长调节剂配比对三种苹果属组织培养的影响,获得三种苹果属植物叶片愈伤组织诱导和增殖的最适培养基。最后将Md MPK4基因转入愈伤组织中,建立稳定遗传转化体系,主要研究结果如下:1.研究了不同浓度植物生长调节剂配比对三种苹果属组织培养的影响。三种苹果属植物初代培养激素配比为0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA,成活率达到80%。‘红富士’和‘澳洲青苹’的最适继代培养激素配比均为0.3 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,增殖系数达2.8。而东方苹果的最适继代培养激素配比为0.3 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,增殖系数达2.5。三种苹果属植物的最适生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L IBA,生根率达75%。2.研究了不同浓度植物生长调节剂配比对三种苹果属植物愈伤组织诱导与生长情况。结果表明,诱导叶片愈伤最适培养激素配比为TDZ 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达80%。继代培养时发现使用1.5 mg/L 2,4-D+0.3 mg/L 6-BA长势最好,增殖系数为2.5。3.为建立稳定转化体系,将Md MPK4基因转入三种苹果属植物。结果表明,三种苹果属植物最佳侵染液浓度OD600值为0.8,侵染时间为8 min,最适的卡那霉素筛选浓度为10mg/L,转化率达到70%。PCR检测表明愈伤组织在约1200 bp处有明显条带,表明Md MPK4基因已转入愈伤组织。与未转入Md MPK4基因的野生型愈伤组织相比,转基因愈伤组织在强光低温环境下培养14 d后变红,说明Md MPK4正向调控苹果花色素苷积累。本文建立了三种苹果属植物的高效再生体系和遗传转化体系,为苹果属植物种质资源保育挖掘、及基因的功能研究奠定了良好的基础。
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