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抗生素等抗菌药物是把双刃剑,在为人类的医疗及农业等领域带来便利生活的同时,也在消耗着人类世界的生存空间及健康财富,这一切主要是由抗菌药物的滥用引起的。在2014年,世界卫生组织(WHO)发布的《抗菌药物耐药:全球监测报告》指出抗菌药物滥用等因素造成的耐药形式严峻,严重地威胁着全球各地人群健康,因此急需可靠有效的治疗真菌感染的方法。 光动力治疗(Photodynamic Therapy,PDT)在抗菌治疗方法中占有重要地位,研究表明光动力治疗安全且操作简单,因其作用方式具有非特异性,所以不易产生耐药现象,而且已有研究表明光动力治疗具有杀伤耐药菌株的潜力。目前虽有关于光动力治疗对白念珠菌杀伤效果的研究,但是采用甲苯胺蓝O(TBO)介导的光动力治疗方法杀灭白念的研究较少,特别是对白念生物膜的杀伤效果研究并未形成一定的系统性。因此TBO-PDT对白念的杀伤效果的研究对相关方法和菌落的处理具有一定的借鉴意义。 本研究拟采取光动力治疗的方法对真菌中的白念珠菌进行体外杀伤效果研究,即以甲苯胺蓝作为光敏剂,以633 nm波长的光作为激发光源,研究白念珠菌浮游形式和生物膜在甲苯胺蓝O(TBO)所介导的光动力治疗下的体外杀伤效果,并在此基础上探索抗真菌药物伊曲康唑或生物合成的纳米银粒子对TBO介导的光动力治疗是否具有促进作用,以期为以后的动物实验及临床治疗真菌感染提供数据基础和方法指导。 主要研究内容与结论: ①以白念珠菌浮游菌(悬浮状态的白念珠菌)作为研究对象,采用菌落计数法(CFU/ml)研究光敏剂TBO在633 nm的红光作用下对白念浮游菌的杀伤效果。通过对比光照前后的存活菌量发现,TBO-PDT能对白念浮游菌进行有效杀伤,并且能够实现完全杀伤的效果。另外,杀伤效果呈现光敏剂浓度依赖性。 ②以白念珠菌生物膜作为研究对象,采用菌落计数法(CFU/ml)以及激光共聚焦显微镜观察法研究光敏剂TBO在633 nm红光作用下对白念生物膜的杀伤效果,通过对比光照前后生物膜中的存活菌量发现,TBO-PDT能对白念生物膜进行有效杀伤,杀伤效果呈现光敏剂浓度依赖性。另外还发现过高的光敏剂浓度会降低光动力治疗白念生物膜的效果。 ③以白念两种形式(浮游菌及生物膜)作为研究对象,采用菌落计数法(CFU/ml)研究抗真菌药物伊曲康唑作用后的TBO-PDT对白念的杀伤效果,并与未用伊曲康唑处理的TBO-PDT方法进行对比。结果发现,预孵育伊曲康唑能有效杀伤白念,且效果比未用伊曲康唑处理的TBO-PDT方法显著。实验结果说明伊曲康唑能增强TBO-PDT治疗白念的效果。 ④首先通过白念生物合成纳米银粒子,然后以白念生物膜为研究对象,采用XTT降低法研究以不同方式作用于TBO-PDT的纳米银粒子的杀伤效果。结果发现,先进行光动力治疗,再用纳米银粒子处理能加强对白念生物膜的治疗效果。实验结果说明生物合成的纳米银粒子能以一定方式辅助加强TBO-PDT对白念生物膜的治疗效果。 综上所述,本研究采用的TBO-PDT对白念的浮游菌形式及生物膜形式的杀伤效果显著。另外还发现,不仅抗真菌药物伊曲康唑能显著增强TBO-PDT对白念的治疗效果,白念生物合成的纳米银粒子也能以一定方式加强光动力治疗杀伤白念生物膜的效果。除了本研究所用TBO浓度及光剂量对相关菌落治疗具有一定借鉴意义以外,还能在一定程度上推动抗菌治疗的进程,具有解除耐药产生的健康威胁的潜力。