人胎盘羊膜间充质干细胞的分离培养及安全性研究

来源 :贵阳医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liangjingyu1
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
研究背景:干细胞作为一类具有自我更新和多向分化潜能的细胞群体,能进一步分化成为多种类型的细胞,构成机体各种复杂的组织和器官。以干细胞治疗为核心的再生医学,将成为继药物治疗、手术治疗后的另一种疾病治疗途径,从而成为新医学革命的核心。间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是应用较多的一类具有多向分化能力的成体干细胞。利用回收的胎盘羊膜组织分离冷冻保存其富含的间充质干细胞,完善干细胞库储备,对于科学研究、临床利用干细胞资源治疗有着重要意义。  目的:本研究旨在分离、培养人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs),并进行体外长期传代培养,通过细胞形态、膜表面标志以及分化特性进行鉴定,同时对遗传稳定性和致瘤性进行研究,从而观察该细胞是否能长期保持间充质干细胞的特性,为人羊膜间充质干细胞的储备和临床应用提供实验依据。  方法:无菌条件下从新鲜人胎盘组织分离出羊膜,采用组织贴壁法和酶消化法在37℃、5%CO2下进行原代细胞分离培养,对不同代数的细胞经流式细胞技术检测其膜表面标志物;并通过将其向神经细胞、成骨细胞和肝细胞样细胞进行诱导分化,观察其分化能力;采用染色体G显带法制备和分析传代细胞染色体核型;通过裸鼠致瘤实验观察hAMSCs的致瘤性。  结果:体外传代培养的hAMSCs形态似长梭型,呈流水状生长,细胞活性高,冻存复苏后仍能保持正常形态,并可在体外稳定扩增,细胞生长曲线呈“S”型;CD90、CD73、CD44、CD105的表达量分别是94.6%、92.3%、94.7%和91.2%,而CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR表达量是0.6%,符合间充质干细胞的生物学特性;而在分化实验的过程中,利用β-巯基乙醇、丁羟基茴香醚向神经细胞诱导,细胞出现多个神经轴突,神经元特异性烯醇化酶检测,DAB染色呈黄色;利用β-甘油磷酸钠、维C和地塞米松向成骨细胞诱导,细胞形成矿化结节,茜素红染色呈红色;利用肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子以及制瘤素等向肝细胞样细胞诱导,甲胎蛋白检测,DAB染色呈黄色;P3-P10代的hAMSCs细胞染色体核型分析显示均为正常二倍体核型,未见易位、缺失、重复等异常改变;裸鼠经皮下注射hAMSCs后,一般状况良好,注射部位皮肤未见肿瘤形成,各器官组织切片结果与正常对照组无区别,未见异常改变。  结论:人胎盘羊膜组织中富含间充质干细胞,且该细胞可在体外稳定扩增培养,10代以内具有间充质干细胞的特性和分化能力,未见染色体核型改变,接种于裸鼠皮下后未见肿瘤形成。本研究为hAMSCs成为干细胞库和细胞治疗的可靠来源提供了实验依据。
其他文献
【摘要】机械能量守恒是物理学中一条重要的定律。本文以高中教材为例,结合文献阐述了高中物理机械能守恒类的学习技巧,在技巧上着重对解题的方法和思路进行了研究,对此提出了一些想法,希望对分析和解决这类问题有效,同时也可以为高中同学提供一些思路希望可以对物理的学习有所帮助。  【关键词】机械能守恒;解题;策略  【中图分类号】G633.7 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089(2017)16-
【摘要】改革开放以后,我国的经济和文化都迅速的发展起来。随着我国的发展和时代的进步,我们国家和教育部门对高中教学提出了更高的要求——培养学生的核心素养,提升学生综合能力。高中的物理教学作为高中教学的重要组成部分,有着启迪学生思维、培养学生理性思想、训练学生自主学习意识等多种多样的作用。作为高中物理教师,我们应该对当今高中物理教学现状进行细致的思索和更为深入的探讨,探寻物理在素质培养教学方面的漏洞,
【摘要】“良好的开端是成功的一半”,一节好的语文课首先要从好的课堂导入开始。一直以来,研究者从导入的概念、作用、方法等方面进行探讨,本人讲以理论和实践为基础对高中语文课堂导入的问题导入进行探究。  【关键词】高中语文;语文课堂;问题导入  【中图分类号】G633.3 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089(2017)16-0294-01  优秀的语文教师特别注意课堂导语的设计,而在众多导
【摘要】PBL(Problem-based Learning)教学模式以其自身的优点迅速成为医学院校改革医学教育的新趋势。医学英语听说教学在现代化的高等医学教育中具有重要地位,是培养和提升医学生专业领域英语语言交际运用能力的重要环节。  【关键词】PBL;教学模式;医学英语;语言交际能力  【基金项目】课题名称:江西中医药大学2015年校级教改课题,编号2015JZJG-57。  【中图分类号】H
期刊
鸡西矿业集团公司张辰煤矿西三采区3
期刊
目的:研究转录因子Cbfczl、PPARγ在骨质疏松、低骨量和骨密度正常组中表达的调控作用,探讨骨质疏松症的发病机制。 方法:选取腰椎手术病人42人,使用QDR4500A扇型DXA骨密度仪
抗菌肽(Antimicrobialpeptide,AMP)是具有抗菌活性的一类短肽,其水溶性好,热稳定性高,能适应较大的pH变化或较高离子强度;AMP合成速度快,因分子小而易扩散,对正常真核细胞几乎没有
【中图分类号】G633.3 【文献标识码】B 【文章编号】2095-3089(2017)16-0297-01  开放式教学是近一年一直在探究的一个问题,也是很多老师一直困惑的难点,所谓开放式教学法就是充分发挥学生的主体作用,让学生敢说、敢做,发散自己的思维。开放式教学指的是在教学过程中始终把学生看作处于不断发展过程的学习主体,看作是一个身心不断构建、升华过程的人,始终把教学过程当作一个动态的、变化
期刊
思维都是从提出问题开始的,在初中数学教学的过程中,教师不但要重视学生的基础知识及基本技能的学习,并且应当以问题作为载体,正确指引学生在错题辨析及解题反思过程中教会学