海洋假单胞菌C40产淀粉酶的发酵生产、分离纯化及性质研究

来源 :中国石油大学(华东) | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaohongm
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从冲绳海域采集到的深海沉积物中,分离到一株淀粉酶高产菌株,经形态学以及生理生化鉴定,结合16S rDNA序列分析,确定该菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),命名为假单胞菌C40。   利用Plackett-Burman设计和响应面法,对海洋假单胞菌C40摇瓶生产的条件和培养基组成进行了系统优化。获得最佳培养基组成为:可溶性淀粉2.00g/L、蛋白胨3.99g/L、酵母膏3.86g/L、盐度3.81%、CaCl20.33g/L;最适发酵条件为:pH6.0、35℃、摇床转速180rpm。   发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析、超滤浓缩和Sephadex G-75凝胶过滤层析四步分离后,淀粉酶纯度达到95%,收率为40.8%。   凝胶层析和电泳分析结果显示,海洋假单胞菌C40产淀粉酶的分子量约为58kDa,该淀粉酶稳定的pH范围为5.0-9.0,最适pH值和最适温度分别为7.0和50℃。Co2+对淀粉酶有明显的激活作用,Mg2+、Ca2+、Fe2+、Al3+、Fe3+、Zn2+、Ni2+、Cu2+等金属离子对淀粉酶有抑制作用,PMSF对淀粉酶无抑制作用,可推断该淀粉酶的活性部位不含丝氨酸。金属螯合剂EDTA和EGTA对淀粉酶有明显的抑制作用,因此,可以推断该酶为金属酶。该淀粉酶的动力学常数Km为1.73mg·mL-1,Vmax为1.24mg·mL-1·min-1。
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