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目的：研究单甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-BAD，20KD)修饰南瓜蛋白(CUS)的最适反应条件以及修饰产物的纯化方法，以目标修饰产物（单聚mPEG-CUS-BAD）为研究对象，对其体内体外抗肿瘤活性及免疫原性进行初步研究，为研制和开发南瓜蛋白的新剂型提供一定的理论依据。方法：1、用SDS-PAGE分析不同反应条件对修饰反应产物的影响；用离子交换柱进行分离纯化。2、用MTT法检测目标修饰产物单聚mPEG-CUS-BAD对体外培养的HL-60、 PANC-1肿瘤细胞的增殖影响。3、应用昆明小鼠H22肿瘤模型观察目标修饰产物单聚mPEG-CUS-BAD的体内抗肿瘤活性。4、应用ELISA技术观察目标修饰产物的免疫原性变化。结果：1、通过筛选，选定CUS与mPEG-BAD的摩尔比为1：5，CUS的浓度2mg/ml，反应时间48h，pH6.5的磷酸缓冲液为最佳修饰反应条件。在此条件下，目标产物单聚mPEG-CUS-BAD的总修饰率可达约65%，经两步离子交换柱的分离纯化，目标修饰产物的最终得率达到约40%。产物经SDS-PAGE鉴定，基本上只显示一条带，表观分子量明显增大，约70KDa左右，纯度大于97%。2、与末修饰的CUS相比，单聚mPEG-CUS-BAD体外抗肿瘤活性大幅度下降。3、与末修饰的CUS相比，单聚mPEG-CUS-BAD体内抗肿瘤作用增强。4、免疫原性分析显示：与CUS相比，单聚mPEG-CUS-BAD免疫小鼠后血清内IgG和IgE水平均有不同程度降低，以IgE水平降低更显著。结论：1、CUS与mPEG-BAD的反应摩尔比为1：5、CUS的反应浓度2mg/ml，反应时间48h， pH6.5的磷酸缓冲液。2、单聚mPEG-CUS-BAD体外抗肿瘤活性显著降低，体内抗肿瘤作用增强，免疫原性有所降低。