目的：　　探讨肽基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)及蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)在大鼠胶原诱导关节炎模型的表达。　　方法：　　CIA模型建立将用0.1 mol/L冰醋酸溶解的CCⅡ与等体积的CFA充分乳化，配成终浓度为0.5g/L的乳剂。大鼠用水合氯醛（用量0.3mL/100g）麻醉后，模型组于大鼠背部及鼠尾根部多点皮下注射配制好的Ⅱ型胶原溶液，总量为1 mL。1周后上述方法、相同剂量再进行1次。对照组注射等体积的生理盐水。　　取材与包埋实验结束时处死大鼠，取左后足跖趾关节，10％多聚甲醛固定1周，脱钙液（盐酸加甲酸溶液）脱钙，用大头针检测脱钙满意后，将关节常规脱水、包埋、切片;同时分离双侧膝关节滑膜组织，立即放入液氮中，随后-80℃冰箱冻存备用。　　观察指标:一般情况观察:观察大鼠体毛的色泽、活动状态、排便及食量的变化情况并每周测定大鼠体重。(2)关节炎指数(AI):根据关节肿胀、颜色及关节活动情况记录并评价大鼠全身关节病变程度，每7d评定1次，共评定6次。评分标准:0分，无红肿;1分，小趾关节稍肿;2分，趾关节和足趾肿胀;3分，踝关节以下的足爪肿胀;4分，包括踝关节在内全部足爪肿胀。四肢肢体的病变程度累积积分为AI，最高为16分。(3)足趾容积的测定:根据排水法原理，用自制的关节容积测量器测量大鼠左后足双踝连线以下全足容积，每周测量1次，共测6次。　　免疫组织化学染色:　　跖趾关节标本均用10％中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，4μm厚切片，采用SP染色，经二甲苯脱蜡和梯度乙醇脱水，组织抗原热修复。滴加一抗（1∶150的兔抗PADI4、1∶50的兔抗PTPN22）后4℃冰箱孵育过夜;滴加二抗，滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素，室温孵育20 min。各步骤间以PBS冲洗5 min，连续3次。DAB显色，苏木精复染。光镜下观察，胞膜或胞浆着棕黄或棕色者为阳性表达。计算染色后PADI4和PTPN22表达阳性细胞的数目。每个处理组做3张染片，每张染片随机计数10个非重叠视野(×400)下的阳性细胞数，数据用x±s表示，用SPSS19.0软件进行方差分析，P＜0.05认为差异有统计学意义。图片采集设备:NIS-ElementsF3.0，分析软件:Nikon NIS-Elements BR3.0。　　Western blot检测:　　用不同时期CIA大鼠膝关节滑膜的做Western blot检测。取保存于-80℃中的膝关节滑膜，加入适量裂解液裂解滑膜组织，超声破碎仪破碎组织后取上清，采用BCAProtein Assay Kit测蛋白浓度后，每个样品均调整为40μg/μl的蛋白终浓度，每孔上样20μl后进行SDS-PAGE电泳。电压强度为80V，电泳1h后，改为120V，电泳2h。电泳结束后，进行转膜，电转移的条件设定为恒电压100V，2h。然后将PVDF膜浸泡入5％的脱脂牛奶中2h，加入一抗后4℃孵育过夜(1∶1000的兔抗PADI4、1∶500的兔抗PTPN22，1∶15000鼠抗GAPDH)。复温30min，TBST洗膜后加入二抗(1∶5000的辣根过氧化物酶驴抗兔/小鼠IgG)室温下孵育2h，TBST洗膜后进行ECL显色反应、曝光、显影、过水、定影。　　Real-time PCR检测:　　取保存于-80℃中的膝关节滑膜，加入1ml Trizol(Gibco BRL，Breda, TheNetherlands)冰上匀浆，离心使RNA充分溶解，测RNA浓度。根据所测浓度，逆转录cDNA:含1ugRNA反应混合物置于42℃，60min。用水稀释引物至100ul，聚合酶链反应PCR后，PCR循环，条件如下:94℃5min;94℃45s; Tm+4℃45s;72℃45s229-34（从第2步开始循环30-35个循环）;72℃7min;4℃12h。PCR结束后置于冰上开始电泳。保存图像。　　统计学分析检测的数据输入SPSS19.0分析软件，计量资料数据用-x±s表示，多样本均数比较采用单因素方差分析，P＜0.05认为差异有显著性意义。　　结果：　　CIA模型组关节炎发展迅速，关节炎指数、足趾容积相对于正常对照组明显增高，PADI4、PTPN22表达亦增多，体重减轻。　　结论：　　PADI4、PTPN22与大鼠胶原诱导关节炎模型有明显的相关性。