蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)为《中国药典》(2015年版)药材水蛭的基原动物之一,其干燥全体具有破血通经、逐瘀消癥的功效,用于治疗血瘀经闭、癥瘕痞块、中风偏瘫、跌扑损伤,是众多治疗心血管疾病中成药的主要原料。目前,蚂蟥市场需求大,蚂蟥野生资源日益枯竭,人工养殖已成必然趋势。近年来众多学者对蚂蟥呼吸和消化生理、摄食规律、养殖密度及投喂频率等方面做了大量研究,蚂蟥人工养殖已初步获得成功。本团队研究发现在人工高密度集约化养殖条件下,夏季高温容易滋生细菌引发细菌性疾病,从而影响蚂蟥生产效率和市场供应。本实验拟通过对夏季高温蚂蟥病原性细菌的探究,确定夏季高温蚂蟥病害的病原细菌,确定病原细菌对蚂蟥不同组织的损害及理化特性的影响,为夏季高温蚂蟥细菌性疾病的防治提供科学依据。研究结果如下:(1)利用16S rDNA技术和传统培养手段对患病蚂蟥病灶和肠道进行细菌分离和确定。16S rDNA分子技术表明各处理中细菌相对丰度均以变形菌门、拟杆菌门、厚壁菌门细菌最为丰富。与健康蚂蟥肌肉、肠道相比,发病蚂蟥肌肉、肠道中拟杆菌属、假单胞菌属、脱硫弧菌属细菌相对丰度显著升高,且在发病蚂蟥养殖水体和沉积物中具有含量丰富,说明拟杆菌属、假单胞菌属、脱硫弧菌属细菌大量增殖是诱发蚂蟥细菌性疾病的原因之一。利用传统分离手段从患病蚂蟥肌肉和肠道中分离得到的细菌经鉴定为荧光假单胞菌,通过回归感染发现蚂蟥感染荧光假单胞菌与蚂蟥自然患病症状一致,同时发现低浓度的荧光假单胞菌对蚂蟥的致死率低,高浓度荧光假单胞菌对蚂蟥具有很强的致死性,致死率为100%。表明荧光假单胞菌为高温患病蚂蟥的病原菌之一。(2)组织切片结果表明该细菌性疾病对蚂蟥肠道和肌肉组织结构具有显著影响。该细菌性疾病会引起蚂蟥肠道皱缩,肠道内壁肿胀,破坏组织细胞结构,导致蚂蟥肠道细胞分散,排列不整齐、细胞间质稀疏、细胞间隙变大;该细菌性疾病会破坏蚂蟥肌肉细胞结构,引起蚂蟥肌肉细胞细胞膜破裂、细胞核溶解、细胞壁肿胀、细胞排列稀疏。(3)细菌性疾病对蚂蟥肌肉和肠道的理化特性具有显著影响。患病蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶(SOD、CAT、POD)酶活力较健康蚂蟥肌肉和肠道酶活力均显著降低(P<0.05);患病蚂蟥肌肉和肠道的能量代谢酶(LDH、SDH、MDH)酶活力较健康蚂蟥肌肉和肠道酶活力均显著降低(P<0.05);患病蚂蟥肌肉和肠道中热激蛋白70、90和凝集素基因表达量较健康蚂蟥显著升高(P<0.05)。细菌回归感染实验结果表明细菌感染后蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶、能量代谢酶酶活力均表现出先上升后下降的趋势,在感染后期感染蚂蟥肌肉和肠道的抗氧化酶、能量代谢酶活力均显著低于对照组;感染蚂蟥肌肉和肠道热激蛋白和凝集素的相对表达量同样呈现先升高后下降的趋势,但在感染后期其相对表达量仍均显著高于对照组肌肉和肠道。