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目的:苯并芘(BaP)是一种广泛存在于环境中的雌激素干扰物。课题组前期的研究发现,苯并芘暴露会导致小鼠的妊娠率下降,胚胎着床点明显减少,雌孕激素及其受体发生异常改变,证实苯并芘对胚胎着床产生影响,但其的机制还需要进一步探究。胚胎的成功着床取决于胚泡的侵入能力和子宫的功能状态,子宫内膜细胞凋亡的平衡对围着床期子宫功能的建立至关重要,而这个过程涉及多条通路,其中Wnt信号通路是比较受到关注的。本研究旨在探讨苯并芘对围着床期小鼠子宫内膜Wnt信号通路及细胞凋亡的影响,为进一步研究苯并芘的生殖毒性提供实验依据。方法:实验采用前期已经证实的BaP有效剂量0.2mg/kg/d,以灌胃的方式,建立妊娠第1天(D1)至第6天(D6)的染毒孕鼠模型,分别于孕4,5,6天收取子宫内膜材料,进行以下实验:(1)Western blot,免疫组化的方法检测子宫内膜容受性的分子HoxA10的蛋白表达。(2)Real-time PCR,Western blot和IHC检测Wnt5a,β-catenin和GSK-3β的表达情况。(3)TUNEL法检测子宫内膜组织细胞的凋亡,Western blot检测BAX,BCL2,Caspase3表达。体外培养人子宫内膜基质细胞,建立BaP染毒细胞模型,进行以下实验:(1)Western blot检测Wnt信号通路相关基因表达情况,免疫荧光检测β-catenin表达。(2)流式细胞术检测子宫内膜基质细胞凋亡情况及凋亡相关蛋白表达。(3)在BaP染毒同时给予Wnt5a重组蛋白或Wnt5a抑制剂处理,Western blot检测Wnt信号通路相关基因及凋亡相关基因的表达情况结果:(1)苯并芘暴露的小鼠,子宫内膜组织容受性相关基因HoxA10表达下降;Wnt5a和β-catenin蛋白表达上升;抗凋亡基因BCL2表达上升,促凋亡基因BAX表达下降,TUNEL检测子宫内膜细胞的凋亡下降。(2)体外培养人子宫内膜基质细胞经BaP处理后,Wnt信号通路的改变与体内实验基本一致,流式细胞术检测结果显示细胞凋亡率下降。(3)人子宫内膜基质细胞给予Wnt5a重组蛋白处理后,Wnt5a蛋白表达升高,凋亡相关基因表达下降,与BaP处理结果相似;在Wnt5a和BaP处理组分别给予Wnt5a抑制剂处理,可部分恢复苯并芘诱导的上述改变。结论:由上述的实验结果得出结论:苯并芘通过干扰Wnt信号通路中Wnt5a和β-catenin的表达,打破了Wnt信号通路对子宫内膜细胞凋亡平衡的调控。