第一部分谷氨酰胺缺乏对危重病患者免疫炎症反应的影响　　 目的：探讨谷氨酰胺缺乏对危重病患者免疫炎症反应的影响。　　 方法：筛选40例APACHEH评分>=8分的危重症患者，同时选取健康志愿者10例作为对照。所有患者均在入ICU后48h内留取静脉血标本，健康志愿者清晨6点空腹留取静脉血标本，观察患者血谷氨酰胺水平及炎症反应的变化。　　 结果：危重病患者血谷氨酰胺浓度明显低于健康对照组，并且与APACHEп评分呈明显负相关(r＝-0.572，P<0.05)。炎症反应指标中TNF-α(r=-0.750，P<0.05)和IL-10(r=-0.723，P<0.05)与血谷氨酰胺浓度呈明显负相关。　　 结论：危重病患者存在谷氨酰胺缺乏，血谷氨酰胺水平的下降对机体炎症反应有一定的影响。　　 第二部分谷氨酰胺对热休克蛋白70及细胞因子表达的影响　　 目的：观察谷氨酰胺抑制人外周血单个核细胞细胞因子表达是否与HSP70介导有关。　　 方法：Ficoll密度梯度离心法提取健康志愿者新鲜PBMCs，将分离得到的细胞分为两部分。第一部分细胞分为六部分，分别用不同浓度的Gln(0、8、15 mmol/L)预处理0.5 h及2.0 h后，再用10g/L内毒素刺激4.0 h，留取细胞及上清。第二部分细胞分为A、B、C三组，将HSP阻断剂Quercetin(200 umol/L)加入A组及B组中，作用0.5 h；再将谷氨酰胺8 mmol/L加入A组和C组中；1.0 h后在三组中均加入10 g/L内毒素刺激4.0 h，留取细胞及上清。酶联免疫吸附(ELISA)测定上清中PBMCs肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的表达，免疫印迹(Western blot)技术检测细胞内HSP70的表达情况。对指标检测结果进行统计学分析。　　 结果：8 mmol/L及15 mmol/L谷氨酰胺预处理0.5 h后能够明显增加HSP70的表达(P<0.05)，8mmol/L谷氨酰胺预处理2.0 h后能明显增加HSP70的表达(P<0.05)。同时TNF-α和IL-10表达受抑(P<0.05)；使用HSP70阻断剂Quercetin后，HSP70表达量明显下降，同时TNF-α和IL-10表达增加(P<0.05)。　　 结论：谷氨酰胺抑制内毒素刺激下PBMCs细胞因子的表达与HSP70介导有关。　　 第三部分谷氨酰胺对磷酸化p38及细胞因子表达的影响　　 目的：观察谷氨酰胺(Gln)抑制细胞因子的表达是否与p38磷酸化有关。　　 方法：Ficoll密度梯度离心法提取健康志愿者新鲜外周血单个核细胞，在培养液中加入Gln、p38MAPK通路阻滞剂(SB203580)和HSP70阻断剂(Quercetin)，用内毒素刺激4h后留取细胞及上清，酶联免疫吸附法测定内毒素刺激下单个核细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素10(IL-10)的表达，Western Blot技术检测细胞内磷酸化p38的表达情况。　　 结果：Gln能够明显增加HSP70的表达，同时TNF-α和IL-10表达受抑；使用Quercetin和SB203580后，磷酸化p38减少的同时TNF-α和IL-10也减少了。　　 结论：谷氨酰胺下调LPS刺激下PBMCs细胞因子的过度表达依赖于p38MAPK信号蛋白的抑制。