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目的探讨荷瘤小鼠微波热消融后肿瘤细胞热休克蛋白(Heat Shock Proteins,HSPs)表达的变化规律;肿瘤周围抗原呈递细胞的变化以及T细胞活化所必需的抗原特异性第一信号主要组织相容性复合体(Major Histocompatibility Complex,MHC)H-2K~b/H-2D~d和I-A~d分子和作为第二信号的共刺激分子CD86的表达变化;同时探讨微波消融肿瘤细胞悬液对巨噬细胞抗原呈递功能的影响。材料与方法(1)组织学实验:将种植成功的H22肝癌皮下移植瘤小鼠分为实验组和对照组,均行乙醚麻醉,以14G硬质裂隙微波天线沿结节长轴方向插入中心,实验组以20W功率作用120s进行微波热消融,对部分实验组微波天线旁开5mm进行测温,均迅速达到50℃以上,对照组持续时间相同,但不辐射微波。分别于6h、12h、18h和24h随机脱颈处死实验组和对照组各8只实验小鼠,无菌快速取出肿瘤结节。Power Vision二步法免疫组化染色,观察肿瘤细胞HSP27、HSP60、HSP70、和HSP90α微波消融后在细胞膜及细胞内随时间变化的表达情况;观察肿瘤组织周边MD-1分子阳性表达的抗原呈递细胞数量变化、MHC H-2K~b/H-2D~d和MHC I-A~d分子以及CD86分子等免疫相关分子的表达情况以及CD4、CD8淋巴细胞的浸润状况。(2)细胞学实验:巨噬细胞来源于小鼠腹腔。实验组在培养体系中直接加入50W600s微波加热后的H22肿瘤细胞悬液0.5ml(约5×10~6个)共同孵育,对照组加入未经微波凝固处理相同浓度的H22肿瘤细胞,空白对照组加入无菌生理盐水0.5ml。分别于9h、18h、27h、36h和45h终止实验,免疫组化分别检测MD-1、MHCH-2K~b/H-2D~d和I-A~d以及CD86分子表达强度的变化,并观察巨噬细胞形态变化。同时,以上述微波消融灭活H22细胞悬液经腹腔免疫小鼠,观察腹腔再接种肿瘤细胞和未经腹腔免疫直接接种肿瘤细胞的两组小鼠的生存时间。结果(1)肿瘤细胞HSPs表达的结果:微波消融前,H22肿瘤细胞也有低水平的HSPs的表达,以细胞浆表达为主,其中HSP60的表达强度最高。微波消融后,中心坏死区周边的边缘肿瘤细胞几乎均有HSP27、HSP60、HSP70和HSP90α的表达强度明显增加,与假手术组相比,微波热消融后各种HSPs的表达强度均较强(P<0.001),强表达持续的时间较长,微波消融后24h HSP27、HSP70和HSP90α细胞膜表达为主的细胞明显增多,但HSP60的定位未见显著改变。从表达峰值看,HSP27和HSP60的表达强度峰值的时间为第24h,HSP70的表达强度峰值的时间为第12h,HSP90α的表达强度峰值的时间为第18h。(2)抗原呈递细胞浸润和免疫相关分子表达的结果:微波消融后的肿瘤周围组织中的MD-1、MHC H-2K~b/H-2D~d和I-A~d、CD86分子阳性的细胞和淋巴细胞浸润的数量明显增加,甚至可见浸润到边缘肿瘤组织内部,特别是体积相对较大的MD-1分子表达阳性的专职抗原呈递细胞明显增加。(3)巨噬细胞抗原呈递功能的结果:实验组巨噬细胞与微波消融灭活H22细胞共同孵育后,免疫相关分子MD-1、MHC H-2K~b/H-2D~d和I-A~d、CD86的阳性表达均有显著增加,其中,H-2K~b/H-2D~d和I-A~d分子在9h表达最强,MD-1分子和CD86分子在18h表达最强,但是,活化后的巨噬细胞寿命较短,第36h和45h组巨噬细胞数量明显减少。自9h起,对照组巨噬细胞基本全部死亡。经微波消融灭活H22细胞悬液腹腔免疫后再接种肿瘤细胞小鼠比未经腹腔免疫直接接种肿瘤细胞小鼠的生存时间明显延长,累积生存率明显增高(P=0.026)。结论微波热消融治疗能够明显提高肿瘤细胞HSPs的表达,并且使细胞膜HSPs表达有增加的趋势;微波热消融还能使肿瘤周围组织中的抗原呈递细胞浸润增加,使T细胞活化所必需的抗原特异性第一信号MHC分子和第二信号的共刺激分子CD86的表达增加;微波消融肿瘤细胞悬液可以激活巨噬细胞抗原呈递功能,使其MHC分子和CD86分子的表达明显增加。