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目的:在细胞、mRNA、蛋白的水平上研究不同胞内密度细胞的代谢变化,进一步探讨细胞代谢模式改变与DANCE(Density Alteration in Non-physiological Cells)的关系。方法:1. K562细胞分为对照组和0.1%VA(维甲酸)实验组,37℃培养48h,进行非连续蔗糖密度梯度离心(Discontinuous Sucrose Gradient Centrifugation,DSGC),分离细胞各条带。2. Annexin V-PI双染法检测K562细胞中的S60、S50(正常组)、S50、S40(VA组)四条带细胞的凋亡情况。3.高通量测序检测S50、S40(VA组)细胞中基因组mRNA的表达水平。4.通过Real-time PCR、Western Blot检测不同条带K562细胞的mRNA和蛋白表达差异。5.应用淋巴细胞分离液分离并制备糖尿病人外周血白细胞,再经DSGC分离得到S60、S50两条带白细胞。6. PCR和Western Blot检测不同条带白细胞(糖尿病)的mRNA和蛋白表达差异。结果:1.对照组K562细胞经DSGC分离得到S60和S50两条带,0.1%VA处理的实验组则分离得到S50和S40两条带。2.对照组的S60和S50以及VA实验组的S50和S40四条带的细胞经流式分析发现,细胞坏死的比例依次增加,以实验组S40条带细胞的最高。3. VA实验组S50与S40两条带细胞的基因表达谱具有显著性差异。与S50相比,S40的细胞有62个基因的mRNA表达显著上调,另有19个基因的mRNA表达显著下调。4. Real-time PCR和Western Blot检测部分与细胞凋亡和DNA修复相关基因的mRNA和蛋白水平,我们发现VA实验组的S50与S40两条带细胞的mRNA及蛋白水平具有显著差异,该结果与高通量基因表达谱分析的结果一致。5. DSGC分离糖尿病人外周血白细胞得到的S60和S50两条带细胞经PCR和Western Blot分析,发现炎症相关因子CD36和IL-6两个基因的表达水平具有显著差异,CD36在S50白细胞中的水平显著高于S60细胞,但IL-6在S60白细胞中的水平则显著高于S50细胞。结论:K562细胞和糖尿病人外周血白细胞的DANCE反应伴随着细胞中基因表达谱的改变,提示细胞的DANCE反应与细胞的代谢改变密切相关。