研究背景肺纤维化是一种以肺部结构病变为特征的疾病,是正常的肺泡组织在受到损伤的情况下异常修复导致的结果,当肺组织结构受到损伤时会出现轻微的炎症反应,然后分泌胶原蛋白对肺间质组织进行修复,如果肺泡内的渗出物和碎屑不能被有效的清除,就会使过量的胶原沉积,引起肺部发生瘢痕性纤维化。MicroRNAs(miRNAs)在机体组织与细胞内广泛参与多种生理、病理过程的调控,与细胞增殖、分化、凋亡调控及组织器官发育、代谢等过程密切相关。已经有研究证实,miRNA广泛参与了肿瘤、自身免疫性疾病及其他系统疾病的发生发展,并在多种疾病中起重要作用。研究表明,miR-21在肺纤维化的发病机制中起着重要的作用。核因子κB(NF-κB)是一个与炎症性细胞因子密切相关的核转录因子,它调控许多炎症性细胞因子mRNA的表达,与炎症性疾病关系密切。NF-κB激活炎性细胞因子TNF-α和IL-1β,引起肺泡炎,并诱导产生TGF-β,激活TGF-β/Smad信号通路,引起胶原分泌,最终导致肺纤维化。本实验通过建立肺纤维化模型,并给予白藜芦醇干预,研究白藜芦醇对肺纤维化的作用,探讨白藜芦醇对miR-21和NF-κB的影响,了解白藜芦醇在干预肺纤维化过程中的机制。目的研究白藜芦醇对肺纤维化的干预作用及白藜芦醇对miR-21和NF-κB表达的影响。方法取90只雄性SD大鼠,在试验条件下饲养3天后,随机分为3个组,每组30只,分别为正常对照组(A组)、肺纤维化模型组(B组)和肺纤维化白藜芦醇干预组(C组)。A组不进行造模,模型组B组和干预组C组分别以气管注入博来霉素的方法诱导建立肺纤维化模型。造模成功后,A组、B组给予生理盐水灌胃;C组给予白藜芦醇灌胃,分别于7天、14天、28天处死10只进行检测。结果1.肺组织的大体观察正常对照组肺脏的表面光滑,未见出血点。模型组:第7天时可见肺体积增大,表面散布着出血点;第14天出血点增加,局部组织结构出现结节状变化;第28天体积缩小,颜色变为苍白,局部实变,表面出现凹沟的结构变化。白藜芦醇干预组:第7天时肺体积有稍微增大,表面可见出血点;第14天出血点有所增加;第28天硬度增加,局部出现结节状结构变化。2.病理切片HE染色及Masson染色HE染色观察可见,正常对照组大鼠的肺组织结构正常,肺泡饱满,肺泡腔形状规则、大小一致,肺泡壁薄,未见炎细胞浸润;模型组:大鼠第7天时部分区域肺泡间隔,可见大量的炎性细胞浸润,炎症灶形成,间质内成纤维细胞增生,部分肺泡缩小、塌陷。第14天时肺泡结构破坏明显,肺泡腔不规则,肺泡间隔明显增宽,但炎性细胞浸润减少,成纤维细胞明显增多。第28天时肺泡结构破坏严重,部分肺泡消失,呈实性变,炎性细胞浸润明显减少,成纤维细胞大量增生,局部肺组织成蜂窝样改变;白藜芦醇干预组:与模型组有着相似的病理变化,但白藜芦醇干预组各个时间点肺组织病理变化和模型组同期相比明显减轻。Masson染色可见,正常对照组大鼠的肺支气管壁可见薄层蓝染的纤维组织,肺泡及间质内未见蓝染的纤维组织沉积;模型组:大鼠的肺组织第7天时可见少量蓝染的纤维组织沉积,主要分布在支气管及小血管周围,肺泡间隔增宽。第14天时肺组织支气管周围胶原纤维沉积明显增多,肺泡间隔进一步增宽,较多胶原纤维沉积。第28天时肺组织中大量胶原纤维沉积,呈斑片状分布;白藜芦醇干预组:与模型组有着相似的病理变化,但白藜芦醇干预组各个时间点肺组织病理变化和模型组同期相比明显减轻。3.羟脯氨酸含量测定正常对照组中羟脯氨酸的含量几乎没有变化;模型型组中各个时间点的羟脯氨酸含量均明显高于正常组,随着时间的推移,羟脯氨酸含量呈升高趋势,28天时达到最大值,与正常对照组比较具有显著性的差异(P<0.05);白藜芦醇干预组中各个时间点羟脯氨酸的含量变化趋势均同模型组类似,28天时达到最大值;白藜芦醇干预组与模型组相比较有明显的降低。4.NF-κB P65蛋白的检测Western blotting结果显示,NF-κBP65蛋白在正常对照组中弱表达;模型组第7天、14天、28天各个时间点NF-KBP65的蛋白表达量与正常对照组相比均有明显升高,其中第7天NF-KBP65蛋白的表达量达到最大值,随着时间的推移,第14天、28天NF-κBP65蛋白的表达量呈现逐渐降低的趋势;白藜芦醇干预组各个时间点NF-KBP65的蛋白表达量较正常对照组有显著升高,且NF-κB P65的蛋白表达量的变化趋势与模型组一致,均在第7天达到最大值,随后第14天、第28呈现逐渐降低的趋势。但是白藜芦醇干预组各个时间点NF-KBP65蛋白的表达量和模型组同期相比均显著降低(P<0.05)。5.miR-21与Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原mRNA的检测对PCR检测结果分析,模型组miR-21的表达量较正常对照组有明显增加,其中第7天miR-21的表达量达到最大值,但随着时间的推移,第14天、28天miR-21的表达量呈现逐渐的降低的趋势;白藜芦醇干预组miR-21表达量的变化趋势与模型组一致呈现逐渐的降低的趋势,但与模型组相比明显减轻;模型组中Ⅰ型胶原mRNA的表达量均较正常对照组有明显增加,但随着时间的推移,Ⅰ型胶原mRNA的表达量呈现逐渐的升高的趋势,第28天Ⅰ型胶原mRNA的表达量达到最大值;白藜芦醇干预组各个时间点Ⅰ型胶原mRNA的表达量较正常对照组也显著升高,且Ⅰ型胶原mRNA表达量的变化较模型组有明显的降低;模型组Ⅲ型胶原mRNA的表达量均较正常对照组有明显增加,其中第7天Ⅲ型胶原mRNA的表达量达到最大值,但随着时间的推移,第14天、28天Ⅲ型胶原mRNA的表达量呈现逐渐的降低的趋势;白藜芦醇干预组第7天、14天、28天各个时间点Ⅲ型胶原mRNA的表达量较正常对照组也显著升高,且Ⅲ型胶原mRNA表达量与模型组相比有明显降低。结论1.白藜芦醇对盐酸博来霉素诱导的大鼠肺纤维化具有一定的改善作用。2.白藜芦醇对miR-21及NF-KBP65的蛋白表达有一定的抑制作用。3.白藜芦醇改善肺纤维化的机制可能是通过下调miR-21及NF-κB来减轻胶原的沉积,最终达起到对纤维化的缓解作用。