目的:胃癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,因其早诊率低,患者确诊时常常处于晚期阶段。因此化疗是胃癌晚期患者的主要治疗手段,其中5-氟尿嘧啶(5-FU)是胃癌治疗的基础用药,但其耐药问题严重,已引起全球关注。四跨膜蛋白9(TSPAN9)是一种四跨膜蛋白,在肿瘤进展和细胞间信息传递中起着重要作用。先前的研究发现,它与肿瘤的侵袭,转移和自噬密切相关。本研究旨在深入探讨其在胃癌5-FU耐药中涉及的分子机制,为攻克胃癌耐药提供新思路。方法:采用荧光定量PCR和免疫印迹法检测TSPAN9在正常胃上皮细胞及胃癌细胞中的表达情况,并通过免疫组化检测在胃癌及癌旁组织中进行了验证。通过逐渐暴露法培养5-FU耐药胃癌细胞株,再次检测TSPAN9在敏感及耐药胃癌细胞株中的表达差异。通过细胞功能实验,例如CCK-8,检测TSPAN9对胃癌细胞的增殖情况和对5-FU敏感性的影响。Western blot用于分析由TSPAN9诱导的PI3K/AKT/mTOR介导的自噬途径。最后利用免疫共沉淀法以评估TSPAN9影响PI3K途径的特定机制。结果:在本实验中,我们发现TSPAN9在肿瘤组织中的表达要低于正常组织,并且TSPAN9的高表达状态往往预示着较差的预后。同时发现其在5-FU耐药胃癌细胞株中过表达,并且通过增加TSPAN9的表达可以明显恢复5-FU抑制的细胞增殖,而抑制TSPAN9的表达可以恢复5-FU耐药胃癌细胞对5-FU的敏感性。此外,TSPAN9还显著促进了体外胃癌细胞的自噬水平。进一步的研究证实,TSPAN9与PI3K蛋白能发生相互作用并抑制其催化活性,因此TSPAN9通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路和下调PI3K介导的自噬相关蛋白的表达影响胃癌细胞中的自噬水平,进而影响胃癌细胞对5-FU的耐药性。结论:本研究表明,在胃癌细胞中,TSPAN9与PI3K相互结合降低了 PI3K的催化活性,通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活增强了胃癌细胞的自噬水平,进而促进了胃癌细胞的5-FU抗性。而TSPAN9的磷酸化是促进TSPAN9与PI3K结合的关键。通过这种机制,TSPAN9保护胃癌细胞免受5-FU诱导的细胞死亡并使其耐药性增加。揭示了 TSPAN9在胃癌细胞发生5-FU耐药中的重要作用,为胃癌的临床耐药性研究提供了新的靶点,将为胃癌治疗策略的改进做出贡献。