多梳蛋白家族(PcG)是一类调控基因沉默的表观修饰蛋白,它们可以与其它蛋白形成多种复合物。常见的复合物有多梳抑制复合物I(PRC1),多梳抑制复合物II(PRC2)。哺乳动物中多种同源蛋白的存在及组合方式的不同使得哺乳动物中的PRC1比果蝇中的PRC1更复杂多样,根据PRC1的核心组分PCGFs(PCGF1-6)将PRC1分为六种(PRC1.1-1.6)。实验室前期研究PRC1核心组分的相互作用时,通过质谱分析发现了蛋白Mga(MAX gene associated),随后有研究证实Mga是PRC1.6的一个组分,与我们前期工作的结果相同。Mga是一种双特异的转录因子,含有3042个氨基酸。Mga在维持胚胎干细胞的多能性以及胚胎发育早期起着重要作用。Mga是PRC1.6的一个组分,由于蛋白比较大,目前有关它的研究还较少。它与PRC1.6其他组分之间的互作关系,自身的表达及调控及其在PRC1.6复合体中担任的角色等尚无报道。故本课题以Mga为切入点研究其分子功能进而更加深入的探讨多梳蛋白复合体PRC1.6的功能机制。基本方法:(1)通过BiFC及Ni-pulldown在体外及体内寻找RING1B与Mga发生相互作用的主要区段。(2)采用Real-time PCR的方法检测小鼠各个组织中Mga的变体的表达,建立Mga各种转录剪切体的组织表达谱图。(3)前期工作:实验室已构建Mga敲低的干细胞,微阵列得到Mga敲低前后变化的基因。本实验通过Ingenuity Pathway Anaylsis(IPA),Gene Ontology,PANTHER Classifiation System等生物信息学的手段将Mga敲低后上调的基因与PRC1.6复合体的组分Pcgf6,L3mbtl2,Ring1b敲低或敲除后转录去抑制上调的基因这些已知数据进行比较,寻找共性。结果与结论:(1)RING1B主要通过C端与Mga的535-640aa这个小片段发生相互作用。(2)Mga的全长转录本Isoform A在检测的几种小鼠组织中的表达量最高,其余转录本仅有较低程度的表达,以Isoform A为代表的几种转录本在睾丸中的表达量最高。(3)干细胞中PRC1.6的组分Mga,Pcgf6,L3mblt2,RING1B共同抑制一系列与精子发生和减数分裂相关的基因。