在甲壳类动物中,Astakine基因是目前唯一已知的作为造血生长因子的分子。这种细胞因子在半颗粒细胞中含量最丰富,并且主要由半颗粒细胞分泌。Astakine含有一个保守结构域,分子质量在8-14k Da之间,含有10个间距保守的半胱氨酸,这与脊椎动物PROKs的结构具有同源性。本研究中,我们主要利用RNAi技术抑制拟穴青蟹Astakine基因的表达,进而探究Astakine基因在拟穴青蟹先天性免疫功能中发挥的作用。利用实时荧光定量PCR检测各组织中Astakine基因的表达量,结果显示Astakine在血细胞中的表达量最高,在鳃中的表达量次之,而在肌肉、性腺、肝胰腺和心脏中的表达量很低。在Astakine基因被抑制后,检测青蟹的先天性免疫基因的表达量,结果显示,拟穴青蟹多个重要的免疫基因的表达量均显著下调,其中JAK、Propo、hemocyanin的表达量下降尤为显著;在抑制Astakine基因表达后,酚氧化酶(phenoloxidase,PO)的活性显著下降,而超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性几乎没有变化,以上结果表明Astakine基因能影响部分免疫信号通路和酶活性。拟穴青蟹在感染溶藻弧菌后,Astakine基因在感染的前12小时表达量显著上调,之后随时间推移逐渐下降;血细胞总数则显著增加,而当Astakine基因被抑制后,血细胞总数则显著减少;血细胞凋亡率显著上调,血细胞吞噬显著降低,表明拟穴青蟹Astakine基因可能通过影响细胞吞噬和细胞凋亡作用,参与拟穴青蟹对溶藻弧菌的免疫反应;生存分析结果显示Astakine基因被抑制后,感染溶藻弧菌的拟穴青蟹的死亡率显著上升。拟穴青蟹在感染WSSV后,Astakine基因的表达量在24小时内显著上调,48小时有所下降,72小时再次上升,基因表达量在72小时内均显著高于0小时的;经Astakine-ds RNA处理,血细胞总数显著下降,而血细胞凋亡率则显著上调,WSSV拷贝数显示,Astakine基因被抑制后病毒拷贝数显著降低;生存分析结果显示Astakine基因被抑制后,感染WSSV的青蟹累计死亡率显著上升。以上结果表明干扰Astakine基因的表达可能会削弱青蟹对WSSV感染的抗性,说明Astakine基因参与拟穴青蟹对WSSV的免疫反应。血细胞增殖试验中,Astakine被敲低后,血细胞总数和增殖能力显著下降,而血细胞凋亡率则显著上升。说明Astakine基因参与拟穴青蟹血细胞增殖功能。综上所述,本研究揭示了Astakine基因在拟穴青蟹先天性免疫中的作用机制,证明了Astakine基因参与青蟹对病原体(WSSV或溶藻弧菌)的免疫反应并发挥重要作用,为进一步探究拟穴青蟹先天性免疫的分子机制提供理论依据。