论文部分内容阅读
学习和记忆是人脑重要的功能。本工作着重研究导致智力低下的脆性X智力低下蛋白FMRP以及阿尔茨海默疾病相关的早老蛋白PS1和PS2的相互作用蛋白，进一步探讨FMRP蛋白以及早老蛋白PS1和PS2的功能和可能涉及的信号传导途径，并为疾病发病机制的研究提供新的线索。 一、FMRP与NM23 H2相互作用的研究 脆性X综合症是最常见的遗传性智力低下疾病，其致病基因FMR1编码FMRP蛋白。现已鉴定出十种与FMRP相互作用的蛋白，并发现FMRP能运载特定的mRNAs，调控mRNAs的翻译；FMRP还参与调节树突突触后蛋白的合成和树突棘的成熟。我们试图通过筛选人脑海马文库，进一步寻找与FMRP相互作用蛋白，研究FMRP的功能和可能涉及的信号传导途径。 选用14外显子出核信号序列突变的全长FMRP筛选人脑海马cDNA文库(本室梅品超博士构建)。得到一阳性克隆，测序证明它是人核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK／NM23 H2)。运用双向的酵母双杂交体系证实了FMRP与NM23 H2的相互作用。利用十种FMRP异构体，进行双向酵母双杂交实验，发现NM23 H2与FMRP的作用区域定位于FMRP外显子1-11，与第12-17外显子无关；FMRP外显子1-6和2-7不能单独与NM23 H2相互作用。为进一步证实FMRP和NM23 H2的相互作用，通过细胞免疫共沉淀实验在体内发现，FMRP能与NM23 H2相互共沉淀，证明了FMRP确实能与NM23 H2相互作用，并且这种相互作用是特异的。我们正运用细胞免疫荧光和共聚焦实验观察它们在细胞内的定位和定位区域的变化，并寻找相关的信号途径。 NM23 H2是一种肿瘤转移抑制子，能激活c-myc的转录并参与细胞的生长分化；还能催化合成除ATP之外的其他三种NTP，而NTP是DNA／RNA合成的底物。近来发现NM23能结合Rad，参与Ras信号途径。FMRP可能通过结合NM23 H2来参与Ras相关的信号途径，调节神经元的发育和树突棘的成熟。也可能通过与NM23 H2的结合，作为胞内RNA含量变化的信号，间接地参与基因的表达调控；或通过调节NM23 H2的NTP合成酶活性，改变RNA底物NTP的浓度，反过来调节RNA的代谢。