四倍体胚胎由于其四倍体细胞的互补作用而被广泛的应用于转基因动物的制备。电融合方法制备小鼠四倍体胚胎的体系已经被成功的建立，但目前牛四倍体体外制备体系仍存在一些争议而并未被科学界普遍接受。目前总体上来说，有三种方法被广泛的应用于体外四倍体胚胎的制备：第一种是显微注射法，即通过显微操作技术，细胞核注射入受精卵中，从而制备四倍体胚胎；第二种是抑制细胞质分裂法，如细胞松弛素B或其他细胞分裂抑制药物在卵母细胞孤雌生殖的激活抑制其第一和第二极体排出从而制备孤雌生殖的四倍体胚胎；第三种方法是卵裂球融合方法，即通过使用仙台病毒、聚乙烯乙二醇或电融合方法使两个卵裂球融合，从而制备四倍体胚胎。电融合方法因其相对于化学或病毒处理方法更加安全，相对于显微注射法更加经济便宜、易于操作而被广泛应用于四倍体胚胎的体外制备。本试验检测了牛早期胚胎的分裂时间，并由此确定在中期组和晚期组两个时间段内挑选既同期化且优质的2细胞期胚胎用于电融合。测试了不同的电融合参数对细胞融合以及融合后胚胎发育的影响。通过免疫荧光染色检测了电融合后细胞核的重组过程，并根据融合后细胞细胞核的重组历程的时间差异分离出高纯度的四倍体胚胎。同时，我们也尝试利用一种强有力的细胞质分裂抑制剂秋水仙胺对电融合后胚胎进行处理，抑制其细胞核重组过程，从而制备牛四倍体胚胎。研究结果如下：1.牛2细胞期胚胎电融合后可获取二倍体胚胎和四倍体胚胎，四倍体胚胎的制备率受用于电融合的2细胞期胚胎的细胞周期的不同阶段所影响。2.电融合后胚胎的囊胚的发育率受电融合参数以及不同分裂时间分布的2细胞期胚胎有显著影响。3.本研究通过免疫荧光染色检测电融合后两个卵裂球细胞核发育过程，并最终总结发现二倍体和四倍体是两条完全不同的的核型转变历程。4.电融合后四倍体与二倍体经历了不同的细胞周期，我们根据其细胞周期的时间差异，找到一条电融合后分离四倍体胚胎的有效途径。5.本研究通过对电融合后胚胎处理0.05μg/mL秋水仙胺6h，改变了电融合后两卵裂球细胞核的重组过程，从而著提高了牛四倍体胚胎的体外制备率。