【摘 要】
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H9N2亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是一种在世界范围内广泛流行的低致病性病毒,对家禽造成的症状较为温和,但其会引起宿主机体免疫抑制,因此常伴随着继发感染而大量死亡。在临床上,大量的H9N2 AIV与大肠杆菌混合感染的病例被诊断,两者间的联系必然是解决H9N2 AIV继发感染的关键。本文旨在研究H9N2 AIV继发大肠杆菌感染的机制,并寻求相关的中药制剂调控策
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H9N2亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）是一种在世界范围内广泛流行的低致病性病毒,对家禽造成的症状较为温和,但其会引起宿主机体免疫抑制,因此常伴随着继发感染而大量死亡。在临床上,大量的H9N2 AIV与大肠杆菌混合感染的病例被诊断,两者间的联系必然是解决H9N2 AIV继发感染的关键。本文旨在研究H9N2 AIV继发大肠杆菌感染的机制,并寻求相关的中药制剂调控策略,为H9N2 AIV的防控提供有效的理论指导。前期研究发现H9N2 AIV能引起家禽肠道菌群紊乱,造成肠道黏膜损伤。本文以此为基础做重复验证,并进一步探索H9N2 AIV对菌群易位和肠道代谢的影响,利用Red/ET重组工程构建功能缺失菌评估肠道内环境,阐明H9N2 AIV继发肠道细菌感染的原因,使用中药复方制剂藿香正气口服液调控继发肠道细菌感染,研究表明:1、肠道微生物16s r RNA测序显示,H9N2 AIV感染引起肠道微生物组成与结构变化,肠道内的优势菌群由乳酸菌属变为埃希氏菌属;2、基因q PCR测定显示,H9N2 AIV感染造成肠上皮紧密连接ZO-1、Occludin基因表达量显著下调,IFN-α、IFN-γ和i NOS基因表达量显著上调,肠黏膜受损而通透性增加并发生炎症。标记细菌示踪试验显示肠腔内的细菌能通过肠壁易位到肠系膜,肝脏等组织;3、肠道代谢组学显示,H9N2 AIV感染后肠道内筛选到10种显著差异性代谢物,代谢通路富集分析筛选到8条相关通路,通过与肠道菌群关联分析,埃希氏菌属的变化与谷氨酸和谷氨酸盐代谢,精氨酸生物合成,氮代谢3条通路呈现较强正相关关系。4、利用Red/ET重组工程构建硝酸盐代谢缺失菌,通过体内菌株竞争性试验发现,H9N2 AIV感染后肠道内正常菌和缺失菌间的竞争指数上升,肠道上皮中的硝酸盐含量显著增加,表明硝酸盐是肠道内埃希氏菌属大量生长的原因。5、通过中药藿香正气口服液进行调控干预,能恢复肠道菌群稳态,改善肠道上皮黏膜损伤程度,抑制肠道上皮硝酸盐的产生,有效阻止了肠道内埃希氏菌属的大量增殖及易位。本研究阐明H9N2 AIV继发细菌感染机制,并证实服用中药藿香正气口服液是一种有效的继发感染干预调控策略。
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