自闭症大鼠海马细胞凋亡相关蛋白的表达及电针“长强”穴的干预作用

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目的:1.观察细胞凋亡相关蛋白bax、bcl-2在自闭症大鼠海马的表达。2.观察电针“长强”穴对自闭症大鼠海马bax、bcl-2蛋白表达的影响。方法一:健康成年Wistar雌雄大鼠1:1合笼,第二日清晨,观察大鼠托盘,若有阴栓,则记为胚胎第1天,孕雌鼠单独饲养。孕鼠随机分为两组,一组在E12.5(孕12.5天)时腹腔注射VPA(丙戊酸钠),产下的仔鼠为模型组;另一组正常待产,产下的仔鼠为空白组。产下的仔鼠经发育行为学测评,筛选出自闭症大鼠,再予Morris水迷宫试验测试其学习记忆能力。随机取空白组和模型组大鼠各12只,相同环境下饲养20天,不予干预。疗程结束第二日再予Morris水迷宫试验测试,取脑组织,应用免疫组化和免疫印迹检测技术观察大鼠海马bax、bcl-2蛋白的表达。方法二:造模及测评同方法一。取36只自闭症大鼠随机分为电针“长强”组(长强组)、电针非穴组(非穴组)、非针刺对照组(模型组)各12只,另随机选取空白组大鼠12只。长强组取长强穴,电针刺激(连续波,频率为2Hz,强度为2mA)20min,连续治疗20天为1个疗程,共1个疗程;非穴组取大鼠右胁肋下缘一横指处,余操作同长强组;空白组和模型组在相同环境下饲养,不予干预。疗程结束第二日再予Morris水迷宫试验测试,取脑组织,应用免疫组化和免疫印迹检测技术观察大鼠海马bax、bcl-2蛋白的表达。结果一:1.睁眼试验:与空白组相比,模型组睁眼迟,PN12无差异,PN13、PN14、PN15、 PN16有显著性差异(P<0.05)。2.热板致痛试验:与空白组相比,模型组痛阈升高,PN9、PN11、PN13和PN15有显著性差异(P<0.05)。3. Morris水迷宫:疗程前:与空白组相比,模型组平均潜伏时间延长、穿越平台次数减少,有显著性差异(P<0.05)。疗程后:与空白组相比,模型组平均潜伏时间延长、穿越平台次数减少,有显著性差异(P<0.05)。4.免疫组化:与空白组相比,模型组bax蛋白的表达降低、bcl-2蛋白的表达升高,有显著性差异(P<0.05)。5.免疫印迹:与空白组比,模型组bax蛋白的表达降低、bcl-2蛋白的表达升高,有显著性差异(P<0.05)。结果二:1.睁眼试验:同结果一中睁眼试验。2.热板致痛试验:同结果一中热板致痛试验。3. Morris水迷宫:疗程前:同结果一中疗程前。疗程后:与模型组相比,空白组、长强组平均潜伏时间缩短、穿越平台次数增加,有显著性差异(P<0.05),非穴组平均潜伏时间缩短、穿越平台次数增加,差异无统计学意义(P>0.05)。4.免疫组化:与模型组相比,长强组bax蛋白的表达升高、bcl-2蛋白的表达降低,有显著性差异(P<0.05);非穴组bax蛋白的表达升高、bcl-2蛋白的表达降低,差异无统计学意义(P>0.05)。5.免疫印迹:与模型组相比,长强组bax蛋白的表达升高、bcl-2蛋白的表达降低,有显著性差异(P<0.05),非穴组bax蛋白的表达升高、bcl-2蛋白的表达降低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.自闭症大鼠海马bax蛋白的表达下降、bcl-2蛋白的表达升高。2.电针“长强”穴可激活海马Bax蛋白、抑制Bcl-2蛋白的表达,调控自闭症大鼠海马bax、bcl-2的比例,对神经元异常发育进行调节,进而改善其学习记忆能力。
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