目的 荷红白血病(EL9611)小鼠同基因骨髓移植(syn-BMT)后，经采用非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG-ODNs)联合GM-CSF和／或肿瘤疫苗进行免疫治疗，观察其诱导syn-BMT后抗白血病特异性免疫能力的效应，并初步探讨其免疫机理。为CpG+GM-CSF用于自体造血干细胞移植(auto-HSCT)后白血病免疫治疗提供实验依据。 方法 1、8-10周龄、健康、SPF级、雌性Balb／c小鼠接种EL9611细胞后行syn-BMT，移植后分别以PBS液(A组)；CpG+GM-CSF(B组)；CpG+GM-CSF+肿瘤疫苗(C组)进行免疫治疗。 2、免疫治疗后检测小鼠的血清IFN-γ和IL-4浓度；脾细胞对EL9611靶细胞和ConA激活的淋巴母细胞(C朋)靶细胞的细胞毒活力。 3、免疫治疗结束后，所有存活小鼠用EL9611细胞进行二次攻击，同时以相同剂量EL9611攻击正常小鼠(设为D组)，观察其生存时间和存活率。 4、分别在免疫治疗结束后和EL9611细胞再攻击后14天取外周血检测T细胞亚群。 5、通过外周血涂片和病理形态观察明确小鼠死因。接种EL9611细胞后超过60天，外周血涂片未见有幼红细胞者，为长期无病生存。 结果 1、所有死亡小鼠经外周血涂片和病理检查均死于红白血病。 2、荷红白血病小鼠syn-BMT后60天，对照组11／20只死亡，B组4／20只死亡，C组3／20只死亡(p=0.011)，其平均生存时间：A组32.9±3.7天，B组40.8±4.9天，C组42.6±3.2天(p=0.000)。将长期生存小鼠用EL9611细胞再攻击后，A组5／5只死亡，B组6／12只死亡，C组4／13只死亡(p=0.009)，其平均生存时间：A组21.8±1.9天，B组30.8±2.1天，C组34.5±3.1天(p=0.000)。说明荷红白血病小鼠s叩一BMT后，用印G＋GM｛SF免疫治疗可以显著延长小鼠的生存时间和提高小鼠的无病存活率。 3、荷红白血病小鼠syn－BMT及免疫治疗后，其血清IFN－Y水平明显升高，m组224．二土15，6 Pg／ml，C组274．6士19．IPg／ml，均显著高于A组134．4土28．3Pg加1，P值分别为0．011和0．001）。而血清IL－4水平与对照组比较则显著下降m组49．8士6．7 pg／ml，C组 47．9士5．3Pg／ml，均显著低于A组70．3土4．5 Pg加1中值分另为0．013和0．008）。说明荷红白血病小鼠syn于见后，CpG仆CSF免疫治疗诱导了W 型免疫反应。 4、荷红白血病小鼠syn－BMT及免疫治疗后，长期生存的小鼠的脾细胞对 EL961靶细胞的细胞毒活力显著高于其对 CAB靶细胞的细胞毒活力 （P＝0．000）。用CPG＋GM－CSF免疫治疗的小鼠脾细胞对EL9611细胞的特异性杀伤活力明显增强，C组：83．5 ig．l％，B组：72．8f5．0％均显著高于 A组：52．6土 8．4％…值分别为 0．000和 0．005）。对 CAB靶细胞的杀伤活力，三组间比较无显著差异。 5、荷红白血病小鼠syn－BMT及免疫治疗后，外周血T细胞亚群三组之间比较无显著差异。但经 EL961细胞二次攻击后 14天，A组小鼠 T细胞亚群已有明显改变，CD3＋T细胞％，CD4＋T细胞％明显下降h值分别为：o．0站和0．024），ms八细胞明显上升（p0．022）：而此时8和C组T细胞亚群尚无明显变化；同时，三组CD4＋／CD45RA十和＊＋／CD45RA＋T细胞在免疫治疗后和EL96ll细胞二次攻击后均未见明显的变化。小结1、荷红白血病小鼠syn－BMT后，使用CpG＋GM－CSF免疫治疗不仅可以明 显改善移植后生存率及生存时间，而且可以保护大于 50％小鼠在致 死剂量 EL961细胞H次攻击时获得长期生存。2、荷红白血病小鼠syn－BMT后，使用CpG＋GM－CSF兔疫治疗可以明显增 强小鼠脾细胞的细胞毒活力，明显增加血清IFN－Y的水平及降低 IL－4的水平，说明其通过诱导Thl型免疫反应而增强了特异性抗白 血病免疫能力。 ．3－3、荷红白血病小鼠syn－BMT及使用CpG＋GM－CSF免疫治疗后，虽然外 周血T细胞亚群的比例与对照组长期生存的小鼠比较无显著差异，但 致死剂量EL9611细胞攻击后，对照组的T细胞亚群则出现变化，而 免疫治疗组的T细胞亚群却无明显变化。syn－BMT后早期免疫治疗的 机理可能未涉及到初始T细胞的变化。 由此说明，syn－BMT不仅可以清除绝大部分的肿瘤细胞，而且可以激发一定程度的抗白血病免疫效应；syn亿MT后的 CpG川M｛SF免疫治疗，可以诱导仆 免疫反应，从而显著增强抗白血病免疫能力及具有一定的持续性。本研究为CpG＋GM－CSF用于auto－SCT后白血病的免疫治疗提供了实验依据。