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目的BNIP3(Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa-interacting protein 3,Bcl-2腺病毒E1B 19 kD结合蛋白)是一种促凋亡的线粒体蛋白,属于Bcl-2蛋白家族成员,具有促进细胞凋亡的功能。国内外研究表明,BNIP3在多种肿瘤的发生、发展中有重要的作用。人髓母细胞瘤是颅内恶性程度极高的神经上皮肿瘤之一,有关BNIP3在髓母细胞瘤中的表达及其对肿瘤发展的作用的报道少见。本文旨在从蛋白质和基因两个水平上检测BNIP3在人髓母细胞瘤细胞中的表达,并采用甲基化抑制剂作用于髓母细胞瘤细胞,研究BNIP3基因和髓母细胞瘤的发生、发展的关系以及其对于诱导髓母细胞瘤细胞凋亡的作用,探讨BNIP3是否可以做为治疗髓母细胞瘤的靶标。方法(1)培养人髓母细胞瘤细胞Med-341(购自中科院细胞所),传代备用,并观察细胞的生长情况;另取10例安徽医科大学第一附属医院神经外科颅脑外伤手术切除的非肿瘤小脑组织,经HE染色证实为非肿瘤脑组织作为正常对照组。用免疫组织化学(IHC)方法检测人髓母细胞瘤细胞和非肿瘤小脑组织中BNIP3的表达。(2)收集培养的Med细胞备用;收集安徽医科大学第一附属医院神经外科颅脑外伤手术切除的非肿瘤脑组织新鲜标本5例,经HE染色证实为非肿瘤小脑组织作为正常对照组;应用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction, RT-PCR)技术检测Med细胞和非肿瘤小脑脑组织中BNIP3 mRNA的表达,以Hep-2细胞作为阳性对照;(3)将Med细胞接种于培养瓶中,待细胞生长良好时给予不同浓度的甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷处理,以不加5-氮杂脱氧胞苷为对照,持续作用7d,终止培养。将Med细胞接种于96孔板,用MTT法检测细胞的吸光度值,观察5-氮杂脱氧胞苷对Med细胞增殖的影响。结果(1)免疫组化及RT-PCR实验均表明,BNIP3在Med细胞中有表达,细胞质和细胞核内均有表达;而正常小脑组织中,BNIP3不表达;(2)在观察甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷对Med细胞增殖影响的实验中,1.0μmol/L以上的5-氮杂脱氧胞苷连续作用7天能够有效地抑制Med细胞的增殖,而且随着浓度的增加,其抑制作用增强。1μmol/L的5-氮杂脱氧胞苷对Med细胞的抑制率达38%,这种抑制活性5-氮杂脱氧胞苷在一定浓度范围内有剂量依赖关系。结论(1)BNIP3在Med细胞中的表达高于正常小脑组织的表达,提示BNIP3在人髓母细胞瘤的发生中起一定的作用。(2)甲基化抑制剂5-氮杂脱氧胞苷可以抑制Med细胞的增殖,且在一定浓度内随着浓度的增加,其抑制作用增强。提示甲基化抑制剂可能诱导BNIP3的表达,而BNIP3有可能成为治疗人髓母细胞瘤的靶标。