目的分别运用气相色谱质谱联用技术(gas chromatography mass spectrometry technology GC/MS)与核磁共振(nuclear magnetic resonance 1HNMR)对大鼠非酒精性脂肪肝肝郁脾虚证的血液和尿液进行检测,用主成分分析(PCA)或偏最小二乘法判别分析(PLS-DA),寻找当归芍药散证相关的代谢产物,探讨非酒精性脂肪肝病部分发病机制,为临床诊断治疗非酒精性脂肪肝病提供思路。方法先后购置不同批次SPF级健康雄性大鼠,分别为24只、32只,并分别采用气质联用、核磁共振寻找当归芍药散证代谢产物。将大鼠随机分为空白对照组、模型组、治疗组(首批:当归芍药散加味组;次批:当归芍药散加味组、逍遥丸组)各8只,饲养于清洁级动物房,室内温度保持为(22±1)℃,相对湿度保持为(46±5)%。通过高糖高脂饲料+慢性束缚应激刺激+饥饱失常法+夹尾法,建立NAFLD肝郁脾虚证模型。12周后治疗组大鼠按中药给药剂量等效换算方法连续灌胃用药;同时,对空白对照组和模型组大鼠灌以等容量的蒸馏水,实验期间统计大鼠体重及一般行为学。所有大鼠灌胃30天后,腹腔注射10%的水合氯醛进行麻醉,腹主动脉采血,离心常规制备血清,于-80℃低温冰箱中备用。取出肝组织,分成两份,其中一份用生理盐水冲洗干净置于甲醛中固定备用,剩余一份置于-80℃冰箱保存。通过肝匀浆病理指标验证模型,后制备样本,采用GC-MS、1H NMR技术处理血、尿样本,Xcalibur由RAW格式转化为net CDF格式,图谱经XCMS软件预处理后,将数据导入Excel中进行面归一化,并采用代谢组学软件SIMCA P13.0通过载荷图中的VIP值来寻找差异代谢产物。数据采用SPSS17.0处理,采用组间独立样本t检验、组内单因素分析,以p<0.05表示差异具有显著性。结果(1)动物在实验期间有明显的行为学变化,模型组大鼠病理指标(TC、TG、FFA)异常,说明非酒精性脂肪肝炎肝郁脾虚证模型验证良好,可作为动物学模型参考;当归芍药散加味、逍遥丸均能调控生化指标,有效治疗非酒精性脂肪肝炎肝郁脾虚证。(2)GC/MS结果:得出三种差异性代谢产物,分别为单棕榈酸甘油酯、草酸、碳化二亚胺。与空白组比较,模型组血清中单棕榈酸甘油酯、草酸、碳化二亚胺、乳酸、3-羟基丁酸、甘氨酸、呋喃戊糖苷、半乳糖、葡萄糖、甲胺等18种代谢物均发生变化。血液主要代谢产物分类,可分为:糖类:半乳糖、葡萄糖、阿洛糖;氨基酸:甘氨酸;脂质类:单棕榈酸甘油酯;脂肪酸类:棕榈酸;有机酸:草酸、乙醇酸、乳酸、3-羟基丁酸;其他类:碳化二亚胺、甲胺等。(3)1HNMR结果:(1)血清:在模型组种23种代谢产物水平明显异常,且通过治疗后有显著改变,趋向于正常水平,分别是:氨基酸类:甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、精氨酸、苏氨酸、组氨酸、二甲基甘氨酸;脂肪酸类:柠檬酸、脂肌酸;脂类:甘油、甘油三酯;有机醇类:鲨肌醇、肌-肌醇;糖类:糖原、α-葡萄糖;有机碱类:甜菜碱、乙酰糖蛋白、甲胺、氧化三基甲胺、胆碱;有机酸:3-羟基丁酸、甲酸、醋酸。(2)尿液:与空白组相比,模型组发现27种代谢产物水平有差异,且两个方剂均能有效调控这些代谢产物并趋向于正常,并有统计学意义。分别是:氨基酸:甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丙氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、色氨酸、谷氨酰胺;有机酸:天冬酰胺、氨基己二酸、柠檬酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、3-羟基丁酸、醋酸;糖类:α-葡萄糖;有机碱:甜菜碱;脂类:甘油、糖蛋白脂质、乙酸苯酯;其他类:丙酮、甲胺、氧化三甲胺。结论(1)模型验证良好,且两组模型组的大鼠,经当归芍药散加味灌胃治疗30天后,均能表现出体重增加、食欲增加、理毛次数增加、毛色回转正常等行为学表现。(2)GC/MS结果显示,非酒精性脂肪肝病肝郁脾虚证主要与脂类代谢、能量代谢、炎症反应及免疫相关,且当归芍药散加味可通过调控这些途径,对非酒精性脂肪肝病起到治疗作用。1HNMR检测所得相关标志物,集中表现在脂质、能量代谢、氨基酸代谢异常、IR、炎症反应。(3)当归芍药散加味、逍遥丸均能通过调控脂质代谢、能量代谢水平,减轻脂质过氧化,减轻IR程度。其中,当归芍药散加味主要是改善模型组中的能量代谢,提高葡萄糖的利用率来减轻IR;逍遥丸主要是调控氨基酸水平,减轻氧化应激和脂质氧化程度来减轻IR。(4)两次实验结果,可为研究NAFLD以IR为发病机制及临床治疗提供实验依据。