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死亡相关蛋白激酶是钙调蛋白调节的丝氨酸/苏氨酸激酶,研究发现DAPK的异常表达和多种恶性肿瘤(例如肺癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌等)的发生、发展和转移密切相关。近年来越来越多的研究表明DAPK在肝癌患者中表达缺失,还有在肝癌患者中研究显示DAPK的低表达与淋巴结转移具有密切关系。但是DAPK对肝癌细胞的具体作用及其调控机制并不清楚。研究目的:本研究的目的在于探讨DAPK在肝癌中的表达及其临床意义以及其对肝癌细胞功能的调控作用,并且进一步探究DAPK调控肝癌细胞功能的分子机制,从而明确DAPK在肝癌诊断及治疗中的临床价值。研究方法:首先利用免疫组化检测DAPK蛋白在肝癌患者样品中的表达,结合临床病理资料进行统计分析。其次采用慢病毒感染方式利用Tet-pLKO-shRNA建立肝癌稳转细胞系,从而可调控地降低Hep3B肝癌细胞株中DAPK基因的表达。之后将建立成功、可诱导表达DAPKshRNA的Hep3B肝癌细胞系用于细胞增殖、克隆形成、划痕以及Transwell实验等细胞功能实验,从而检测DAPK基因表达量的降低对肝癌细胞增殖、克隆形成能力、迁移能力和侵袭能力的影响。此外,将稳转细胞系用于蛋白组学以及磷酸化蛋白组学实验,从而筛选表达量和磷酸化水平受DAPK调节的蛋白。实验结果:实验结果显示,DAPK和肝癌患者的生存率也密切相关,DAPK高表达的病人预后较好。且DAPK表达与肝癌患者血清检测到的AFP呈负相关。不仅如此,细胞功能实验结果表明DAPK表达量的降低不会影响Hep3B细胞的增殖和集落形成,但是DAPK表达量的降低却会促进肝癌细胞的迁移和侵袭。通过western blot检测相关蛋白的磷酸化水平,初步验证了磷酸化蛋白组学实验的结果。该结果符合磷酸化组学实验的筛选结果,表明了磷酸化蛋白组学实验的可靠性。综合以上实验结果,得到的结论是DAPK高表达的病人预后较好,并且与肝癌的临床诊断指标AFP密切相关。进一步的细胞功能实验表明DAPK可能是通过抑制肝癌细胞的转移。此外蛋白组学与磷酸蛋白组学实验也筛选出了受DAPK调控的与肿瘤转移密切相关的蛋白或磷酸化蛋白。这一结果表明DAPK可能通过调控与肿瘤转移相关的蛋白的表达量或磷酸化,进而抑制肿瘤转移,从而达到促进生存的目的。这些结果表明DAPK是调控肝癌转移的重要因子,通过调节DAPK的表达来调控肝癌的转移存在可行性,也为肝癌的治疗提供了一个新的药物作用靶点。