桔梗植株再生体系的建立(附:山茱萸种质资源调查研究)

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桔梗 Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.DC.(P.glaucum Nakai)属桔梗科(Campanulaceae),多年生草本植物,是一种常用的重要中药材,其根入药,有润肺、散寒、祛痰、排脓等功效,其中含有多种氨基酸与人体必需微量元素,以及大量亚油酸等不饱和脂肪酸,具有降压降脂、抗动脉粥样硬化等多种作用。本实验对桔梗组织培养进行了系统的研究,建立了其植株再生体系,并对液体培养条件下其生理活性和有效成分累积情况进行了研究,同时还探讨了桔梗总皂甙的提取条件,筛选了桔梗转基因过程中抗生素的浓度、除菌条件等。实验结果如下: 1.利用桔梗叶片、茎段为外植体,对其开展了组织培养及植株再生的研究,筛选出了愈伤组织、不定芽、芽的增殖和生根的较佳培养条件,建立了比较简单可行的桔梗组织培养及植株再生体系,其中培养基MS+2,4-D 2mg/L+6-BA0.5mg/L+NAA 1mg/L+IAA 0.5mg/L上诱导叶片愈伤组织,诱导率可达95.9%;培养基MS+2,4-D 1mg/L+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L+IAA 0.5mg/L上诱导茎段愈伤组织,诱导率可达92.8%。论文还对桔梗愈伤组织的盐耐受性进行了初探。 2.在桔梗愈伤组织液体培养条件下,对其组织细胞的增殖、生理活性和次生代谢产物含量进行了测定,为利用桔梗细胞大规模生产次生代谢产物奠定了一定的实验基础。 3.优化了桔梗皂甙的提取方法、提取溶剂等条件,并采用薄层层析法进行了验证,较好的方法是用甲醇超声提取60min。 4.测定了陕西境内三个桔梗主产地(商洛、汉中及安康)的桔梗药材的总皂甙含量,结果显示:商洛地区的桔梗皂甙含量略高于其它两个产地。 5.以叶片、茎段为外植体,研究了不同抗生素对桔梗愈伤组织诱导及增殖的影响。结果表明,卡那霉素对桔梗愈伤组织的诱导及增殖有不同程度的抑制作用,头孢曲松钠对组织分化生芽有一定的抑制作用;不同外植体对抗生素的敏感程度不同,其中桔梗叶片对卡那霉素的敏感性高于茎段,而叶片与茎段对头孢曲松钠的敏感性几乎一致。 6.筛选出了用于转基因过程适宜的抗生素浓度,得出:在以愈伤组织为外植体进行转化时,选择因子卡那霉素浓度应设定为25mg/L;在以茎段与叶片为外植体诱导愈伤组织进行转化时,选择因子卡那霉素浓度应该分别设定为50mg/L和25mg/L;以两者为外植体诱导不定芽进行转化时,选择因子卡那霉素浓度应该设定为50 mg/L(茎段为外植体)、25mg/L(叶片为外植体);在进行抑菌处理时,建议将头抱曲松钠浓度设定为400 mg/L。 山茱英(Cornus officinalis sieb.Et zucc)属山茱英科(eornaceae)落叶乔木,是一种常用的名贵中药材,其药用部分主要为干燥的果实。山茱英具有降血糖、抗衰老、增强免疫机能的作用,可用于治疗失眠、糖尿病及其他炎症,药用价值极高。本文系统调查了山茱英源产地陕西佛坪县境内现有资源状况,针对结果期不同产地、品种和时期的种实性状进行了研究,作出了初步的种质评价,为进行山茱英的规范化种植(GAP)奠定了一定的基础。
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