化痰消瘤方抗肺癌多药耐药的实验研究

来源 :河南中医学院 河南中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aa6512048
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  目的:观察lewis荷瘤小鼠在化痰消瘤方不同浓度药物作用下瘤重,抑瘤率的变化,采用免疫组化法检测化痰消瘤方对 LRP、MRP1 等人肺癌细胞多药耐药分子的影响,了解其作用机制,为进一步深入研究中药组方抗肺癌细胞耐药提供依据。   方法:从荷瘤小鼠上剥离lewis肺癌,选取生长良好的肿块,制作肿瘤:生理盐水(1:3)的肿瘤匀浆液,细胞计数大于1×106/ml。 于超净工作台内每只小鼠均左侧腋窝皮下接种肿瘤匀浆液0.2ml,7d后接种部位出现5mm皮下结节者,移植瘤模型建立成功。   选取荷瘤成功的72只健康雄性昆明小白鼠,随机分为化痰消瘤方高、中、低剂量组、高剂量+CTX 组,CTX 组及空白对照组。中药组药物用量分别相当于人等效剂量的15倍、10倍、5倍,第2天开始每天灌胃给药1次,0.2ml/d;高剂量+CTX组给予中药 15倍剂量同时配合 CTX 腹腔注射,CTX腹腔注射量为 2mg/d,CTX组仅给予CTX腹腔注射2mg/d,空白组给以0.2ml/d生理盐水灌胃,连续给药15日。每 2 天测小鼠体重,给药结束的第 2 天颈椎脱臼处死动物,称量小鼠体重、移植瘤重。并按下列公式计算抑瘤率:抑瘤率(%)=(对照组平均瘤重﹣实验组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。   组织切片后采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法(S-P 法)检测LRP、MRP1在各组的表达情况,并计算阳性细胞表达例数。   结果:(1)各实验组在小鼠体重表达上与空白组差异不显著,P>0.05;各实验组在瘤重的表达上与空白组差异显著, P<0.01;化痰消瘤方高、中剂量组在瘤重的表达与CTX+高剂量组差异不显著,P>0.05;化痰消瘤方低剂量组在瘤重的表达与CTX+高剂量组差异显著,P<0.01;   (2)免疫组化实验中,低剂量组中MRP1、LRP表达与空白组差异不显著,P>0.05;其余各组中MRP1、LRP表达均与空白组差异显著P<0.01;MRP1、LRP均在化痰消瘤方高、中、低剂量组表达差异明显,P<0.05;MRP1、LRP 在化痰消瘤方高、中剂量组与CTX组表达差异不显著,P>0.05;MRP1、LRP在高剂量+CTX组与CTX组表达差异显著,P<0.05。   结论:实验结果及统计分析显示化痰消瘤方可以减轻瘤重,提高抑瘤率,考虑与其对多药耐药细胞的逆转及抑制多药耐药细胞的增殖有关。化痰消瘤方高、中剂量组可以明显抑制 MRP1、LRP 等多药耐药蛋白的在瘤体中正常表达,使其在瘤体中呈现低表达,且与西药组表达情况无显著差异,且中西医配合其抑制作用更加明显,充分显示了化痰消瘤方对肺瘤多药耐药的逆转作用,并推测化痰法及化痰类药物是中药抗肿瘤多药耐药的一个重要方面。但具体药物发挥的作用仍需要进一步研究。
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