SBA-15介孔分子筛固定化乙酰胆碱酯酶及其对有机磷和氨基甲酸酯类农药杀虫剂含量的测定

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杀虫剂具有良好的杀虫效果,被广泛应用于现代农业生产当中,其残留通过食品传导到人体,严重影响了人类的健康。因此,开发一种快速、稳定的农残检测技术对于环境、食品安全等方面有着重大的意义。根据氨基甲酸酯和有机磷类农药对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性具有抑制作用这一特性,可以利用AChE快速、灵敏地检测这两类农药残留。本文主要研究了利用SBA-15和氨基修饰的SBA-15介孔分子筛固定化AChE的最佳方法和条件,测定了固定化AChE稳定性,并对固定化AChE检测西维因和敌百虫两种农药的含量进行了初步的研究。首先,以嵌段共聚物PEO20-PPO70-PEO20(P123)为模板剂,TEOS为硅源采用水热合成法在酸性条件下合成介孔分子筛SBA-15,并以APTES作为功能化试剂,通过后嫁接法成功制备氨基修饰的SBA-15(即NH2-SBA-15)。通过XRD、N2吸附-脱附、红外、热重分析,证明了合成的物质为SBA-15和NH2-SBA-15介孔分子筛。SBA-15和NH2-SBA-15的孔径分别为12.5 nm和10.2 nm。通过TG-DSC的结果计算出NH2-SBA-15中氨基的修饰量约为2.76 mmol/g。其次,分别以SBA-15和NH2-SBA-15为载体,对固定化条件进行了优化。结果显示在20℃下、0.1 M pH 8.0的PBS缓冲液中分别加入1 mg/mL AChE、10 mg/mL载体、1.5 mM的戊二醛和0.4%BSA,固定化30 min为最佳的固定化条件;同时比较了SBA-15(6.1 nm)、SBA-15(12.5 nm)、NH2-SBA-15(10.2 nm)三种载体的固定化情况,NH2-SBA-15具有最高的固定化效率,几乎所有的酶都固定到了载体上,且没有酶的泄露。以NH2-SBA-15为载体,研究了不同的固定化方式对固定化酶热稳定性的影响,结果表明,NH2-SBA-15吸附-交联法得到的固定化酶AChE-NH2-SBA-15具有最高的热稳定性。在4℃和25℃下分别储藏60天后仍保留了94.5%和82.8%的酶活。循环使用6次后,剩余55.0%的酶活性。最后,利用固定化酶AChE-NH2-SBA-15检测了农药西维因和敌百虫,两种农药的线性范围分别是1.0×10-3-10.0 ppm和1.0×10-5-1.0 ppm,且R2均大于0.98,检出限分别是1.2×10-3 ppm和7.0×10-5 ppm,较游离酶具有更宽的线性域和更低的检出限。西维因和敌百虫的检测回收率分别为94%和103%,RSD均小于5%。
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