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杀虫剂具有良好的杀虫效果,被广泛应用于现代农业生产当中,其残留通过食品传导到人体,严重影响了人类的健康。因此,开发一种快速、稳定的农残检测技术对于环境、食品安全等方面有着重大的意义。根据氨基甲酸酯和有机磷类农药对乙酰胆碱酯酶(AChE)活性具有抑制作用这一特性,可以利用AChE快速、灵敏地检测这两类农药残留。本文主要研究了利用SBA-15和氨基修饰的SBA-15介孔分子筛固定化AChE的最佳方法和条件,测定了固定化AChE稳定性,并对固定化AChE检测西维因和敌百虫两种农药的含量进行了初步的研究。首先,以嵌段共聚物PEO20-PPO70-PEO20(P123)为模板剂,TEOS为硅源采用水热合成法在酸性条件下合成介孔分子筛SBA-15,并以APTES作为功能化试剂,通过后嫁接法成功制备氨基修饰的SBA-15(即NH2-SBA-15)。通过XRD、N2吸附-脱附、红外、热重分析,证明了合成的物质为SBA-15和NH2-SBA-15介孔分子筛。SBA-15和NH2-SBA-15的孔径分别为12.5 nm和10.2 nm。通过TG-DSC的结果计算出NH2-SBA-15中氨基的修饰量约为2.76 mmol/g。其次,分别以SBA-15和NH2-SBA-15为载体,对固定化条件进行了优化。结果显示在20℃下、0.1 M pH 8.0的PBS缓冲液中分别加入1 mg/mL AChE、10 mg/mL载体、1.5 mM的戊二醛和0.4%BSA,固定化30 min为最佳的固定化条件;同时比较了SBA-15(6.1 nm)、SBA-15(12.5 nm)、NH2-SBA-15(10.2 nm)三种载体的固定化情况,NH2-SBA-15具有最高的固定化效率,几乎所有的酶都固定到了载体上,且没有酶的泄露。以NH2-SBA-15为载体,研究了不同的固定化方式对固定化酶热稳定性的影响,结果表明,NH2-SBA-15吸附-交联法得到的固定化酶AChE-NH2-SBA-15具有最高的热稳定性。在4℃和25℃下分别储藏60天后仍保留了94.5%和82.8%的酶活。循环使用6次后,剩余55.0%的酶活性。最后,利用固定化酶AChE-NH2-SBA-15检测了农药西维因和敌百虫,两种农药的线性范围分别是1.0×10-3-10.0 ppm和1.0×10-5-1.0 ppm,且R2均大于0.98,检出限分别是1.2×10-3 ppm和7.0×10-5 ppm,较游离酶具有更宽的线性域和更低的检出限。西维因和敌百虫的检测回收率分别为94%和103%,RSD均小于5%。