目的选用两种雄激素受体阳性的乳腺癌细胞系MCF-7和T47D,通过RNA干扰技术建立雄激素受体(androgen receptor,AR)表达下调的稳转细胞系;随后通过体外功能实验观察乳腺癌细胞在AR蛋白下调后,细胞的增殖功能是否发生改变;以慢病毒为载体将干扰雄激素受体的shR NA有效的整合到T47D细胞中以建立用于体内实验的细胞,观察AR下调组和对照组细胞在裸鼠体内的成瘤情况;提取裸鼠新鲜肿瘤组织总RNA验证AR和Let7a的关系,最后采用免疫组化方法比较两组肿瘤细胞增殖指标Ki67的表达情况。方法利用脂质体转染的方法把干扰雄激素受体表达质粒和对照组质粒分别转染到AR高表达乳腺癌细胞中,在转染48h后,用嘌呤霉素筛选稳转细胞,一个月后得到两种细胞系的稳转细胞,并用qP CR验证AR是否下调;MTT和平板克隆增殖实验来观察雄激素下调组与对照组细胞的增殖能力。随后用慢病毒感染细胞的方法,得到用于体内实验的细胞(AR下调组和对照组细胞);在免疫缺陷鼠体内通过皮下成瘤的方法观察两组细胞的成瘤能力;最后,用新鲜组织提取总RNA,qPCR验证雄激素受体表达及与Let7a的关系以及应用免疫组化SP法检测两组肿瘤组织增殖指标Ki67的表达情况。结果1.在两种乳腺癌细胞系中均分别转染使雄激素受体下调的质粒和对照组质粒,用嘌呤霉素(筛选浓度:T47D—puro浓度:1000ng/ml;MCF-7—puro浓度:1500ng/ml,维持浓度为筛选浓度的一半)在筛选一个月后分别得到两种细胞系相应稳转细胞,并用q-PCR验证转染降表达质粒组细胞的雄激素受体表达确实较对照组细胞下调。2.利用筛选得到的稳转细胞,MTT实验发现在两种乳腺癌细胞系中,AR下调组细胞的增殖能力高于对照组;同样,在平板克隆增殖实验中也出现了与MTT相同的结果,在两种细胞系中,AR下调组细胞形成的克隆数的量明显多于对照组,且所形成克隆的体积也较对照组大。3.以慢病毒为载体感染T47D细胞,并筛选扩增得到用于体内实验的AR下调组和对照组细胞。随后接种于B细胞免疫缺陷的裸鼠体内,一个月后,两组裸鼠成瘤率为100%,但AR下调组裸鼠所形成肿瘤的平均体积明显大于对照组。再次体内实验,接种细胞数量为104/只,一个月后,AR下调组成瘤率为100%,对照组成瘤率为62.5%。第三次体内实验,接种细胞数量为5×103/只,一个月后,AR下调组成瘤率为100%,对照组成瘤率为50%4.利用小鼠新鲜肿瘤组织提取mR NA验证AR和Let-7a关系发现在AR下调组,Let7a表达水平也下调。5.免疫组化结果发现AR下调组Ki67阳性细胞数目明显高于对照组。结论本研究首先选取两种高表达雄激素受体的乳腺癌细胞系T47D和MCF7,通过RNA干扰技术使细胞的雄激素受体表达下调。之后MTT和平板克隆增殖实验发现雄激素受体下调组癌细胞的增殖能力明显高于对照组。在动物体内实验发现雄激素受体下调组细胞成瘤较对照组早,生长速度较对照组快,所形成的肿瘤组织平均体积明显大于对照组。以上结果均说明雄激素受体有抑制肿瘤生长的作用。且免疫组化证实雄激素受体下调组肿瘤组织Ki67阳性百分数明显高于对照组。通过裸鼠肿瘤组织发现雄激素受体与Let-7a表达成正相关,说明雄激素受体抑制肿瘤生长作用与microR NAlet-7a有关。通过三次体内实验结果可见,雄激素受体有可能通过调节microRNAlet-7a来影响乳腺癌干细胞来实现对癌细胞行为的改变,但这一结果还需更多的实验支持。