尿激酶型纤溶酶原激活因子受体高特异性核酸适体的筛选

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目的:利用磁珠依赖的SELEX技术,体外筛选得到可以特异性识别尿激酶型纤溶酶原激活因子受(uPAR)的核酸适体。方法:体外合成含有87个碱基的随机脱氧核苷酸库,以uPAR蛋白和Ni‐bead的耦联复合体uPAR‐bead作为筛选靶标,Ni‐bead作为反筛靶标,利用磁珠依赖SELEX技术筛选可以特异性结合uPAR的核酸适体。利用筛选得到的核酸适体分别与EGFR‐bead、GPC3‐bead、Thrombin‐bead孵育检测核酸适体对蛋白的特异性结合性能。同时检测筛选得到的核酸适体与4株uPAR阳性细胞(U87、U251、SW480、A549)的富集情况。利用流式细胞分析法检测筛选进度以及核酸适体与各种靶标的富集情况。结果:经过16轮的严格筛选得到一条特异性结合uPAR‐bead和uPAR阳性细胞的核酸适体,被命名为DZ‐u1,该核酸适体不与EGFR‐bead、GPC3‐bead、Thrombin‐bead结合。结论:利用磁珠依赖的SELEX技术筛选得到的核酸适体DZ‐u1可以特异性的结合uPAR蛋白和uPAR阳性细胞,为核酸适体在uPAR阳性肿瘤的早期诊断、靶向治疗等领域的应用奠定了基础。
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