【摘 要】
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Rhizoctonia solani AG1 IA是引起水稻纹枯病的致病菌,最近多年,纹枯病已成为中国的主要水稻病,是三大水稻病之一,特别是在华南部分地区,这已经给我国水稻的生产造成了巨大损失。立枯丝核菌AG1 IA作为丝核菌属中第一个基因组测序的菌株,可以为研究其对水稻的致病机制提供一个很好的模型。在前期研究的基础上,本论文通过对水稻纹枯病菌AG1 IA中预测的小分泌蛋白结合转录组数据进行筛选和
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Rhizoctonia solani AG1 IA是引起水稻纹枯病的致病菌,最近多年,纹枯病已成为中国的主要水稻病,是三大水稻病之一,特别是在华南部分地区,这已经给我国水稻的生产造成了巨大损失。立枯丝核菌AG1 IA作为丝核菌属中第一个基因组测序的菌株,可以为研究其对水稻的致病机制提供一个很好的模型。在前期研究的基础上,本论文通过对水稻纹枯病菌AG1 IA中预测的小分泌蛋白结合转录组数据进行筛选和鉴定,利用农杆菌介导的瞬时表达体系,对11个预测的小分泌蛋白能否引发本氏烟产生细胞程序性坏死进行了筛选和鉴定,并对其中能激发植物细胞程序性死亡反应的分泌蛋白(暂命名为RsIA_NP8)进行了功能研究。研究结果表明,在立枯丝核菌AG1 IA中发现小分泌蛋白RsIA_NP8能够引起烟草细胞死亡,但是,去掉信号肽过后则不能引起烟草细胞死亡,信号肽功能验证确定其信号肽能正常行使功能。序列同源性分析表明,RsIA_NP8是立枯丝核菌中比较保守且特有的基因。我们逐个对RsIA_NP8不同的缺失突变体和点突变体进行了功能研究,发现RsIA_NP8的RPT1结构域和自然变异位点RsIA_NP8-20对于引起细胞死亡的功能是必需的。此外,我们利用病毒介导的基因沉默(VIGS)方法来验证RsIA_NP8依赖于SGT1和HSP90来激发细胞的坏死。而不依赖于SERK3和RAR1蛋白。它在水稻纹枯病菌侵染9311水稻品种的过程中受到强烈的诱导表达,并且在侵染前期呈现持续性的上调表达。它在本氏烟中瞬时表达时,能够激发本氏烟的抗病防御相关基因的表达和导致H2O2以及胼胝质的积累。烟草亚细胞定位结果显示,RsIA_NP8基因定位在叶绿体上。采用酵母双杂交方法筛选RsIA_NP8的寄主靶蛋白,目前已经初步获得1个候选互作靶蛋白。
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