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髓系细胞触发受体作为先天性免疫受体中的一类,在宿主先天性防御中起着相当重要的作用,到目前为止,对猪髓系细胞触发受体的研究还没有报导,为了深入了解猪髓系细胞触发受体2的生物学功能,首先根据Gen Bank预测的猪TREM2（NM001256777.1）的全基因序列,从猪肺泡巨噬细胞中提取的RNA为模板扩增TREM2的全基因片段,通过测序验证扩增序列的正确性。选取猪TREM2胞外区基因片段（438 bp）连接到原核表达载体p ET-28a中,利用原核表达系统获得了高效表达于包涵体中的重组TREM2蛋白（约21 k Da）。利用亲和层析技术纯化获得TREM2重组蛋白,以纯化的TREM2重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,每只小鼠免疫约100μg,制备多抗血清,通过Western-Blot证明该多抗血清可以识别猪源TREM2分子。本研究不仅为进一步研究猪TREM2在病原微生物感染中的作用做好铺垫,而且为揭示猪TREM2在猪呼吸性疾病中的作用奠定了基础。本研究分为三个部分:1.猪TREM2基因的克隆与生物信息学分析随着TREM2分子在炎症反应中的作用越来越备受关注,尤其现在猪呼吸道疾病引起的炎症反应在我国兽医临床中的比例越来越大,其传播速度快,发病迅速,给养猪业带来巨大灾难。因此,研究猪TREM2分子在猪呼吸道炎症反应中的作用具有极大的前景。本研究根据Gen Bank预测的TREM2（NM001256777.1）的全基因序列,利用primer5.0设计扩增引物,然后提取猪肺泡巨噬细胞RNA,反转录c DNA作为模板扩增TREM2全基因片段,通过测序验证扩增序列的正确性。与Gen Bank中的参考序列及其编码的氨基酸进行比对,同时将猪TREM2基因的序列分别于人和小鼠的TREM2序列进行遗传的差异性分析,构建了系统进化树,并分析其氨基酸的亲水性、跨膜区及B细胞抗原表位预测,旨在阐明TREM2蛋白抗原表位的分子生物学特性、系统进化关系、研制多克隆抗体和建立新型检测方法提供理论依据和实验依据。2.猪TREM2胞外区原核表达载体的构建、表达及纯化根据克隆到的猪TREM2分子及序列生物信息学分析结果,选取猪TERM2分子的胞外区进行原核表达,设计原核载体表达引物,将猪TERM2分子的胞外区连接到表达载体p ET-28a中。将重组表达载体转化至感受态大肠杆菌BL21（DE3）中,通过对诱导表达条件的优化,确定最佳诱导表达条件。通过SDS-PAGE电泳检测重组蛋白表达情况,利用His-Trap镍离子螯合层析柱将重组蛋白进行纯化,通过SDS-PAGE电泳检测蛋白纯化情况。结果显示在0.4 mmol/L浓度的IPTG中表达14h可以使蛋白得到大量表达,并且纯化成功,为多克隆抗体的制备奠定了基础。3.抗猪TREM2多克隆抗体的制备及应用将纯化得到的重组蛋白与弗氏佐剂按1:1的比例混合乳化,免疫小鼠,免疫量约100μg/只,第四次免疫一周后采血,分离血清得到多克隆抗体。通过Western-Blot证明多克隆抗体的特异性,结果显示免疫得到的多克隆抗体不但能与猪源TREM2分子反应,还可以与真核表达载体表达的猪TERM2的全长反应（约31 KDa）。此次制备的抗猪TREM2分子的多克隆抗体为后续研究猪TREM2分子的功能奠定了基础。