目的:比较免疫组织化学、酶组织化学和苏木精-伊红染色3种方法对喉癌大切片中淋巴管的标记与显示,并在此基础上将较可靠方法所得的阳性染色结构进行三维重建,以验证相关染色方法的准确性。方法:收集喉癌全喉切除术后标本3例,参照改良川本法制作冷冻全喉大切片90张,分别采用免疫组织化学法(淋巴管内皮细胞特异性标记物D2-40)、酶组织化学法(5-核苷酸酶5-Nase)、苏木精-伊红染色方法(HE)进行染色,比较不同方法对喉癌大切片中淋巴管的染色结果,然后在此基础上将染色较可靠的切片图像通过配准、分割后进行三维重建。结果:HE和D2-40免疫组化染色背景较清晰,酶染色背景欠干净,非特异染色较多。经图像质量筛查,剩余21组HE染色切片105个明确的血管结构中,56个(53.3%)5-Nase标记阴性,102个(97.1%)D2-40标记阴性,少量管腔(2.9%)呈部分阳性。D2-40染色对血管的识别率明显高于5-Nase(P<0.001);105个不能明确区分血管或淋巴管的管腔样结构,95个(90.5%)在D2-40染色中获得阳性结果,89个(84.8%)在5-Nase组中呈阳性,两阳性率间差异没有统计学意义(P=0.209),但在5-Nase染色切片中部分腺体组织同时被染;此外,在5-Nase和D2-40染色切片中还可观察到散在呈点状或簇状分布的阳性细胞,而在HE染色中无法识别这些细胞或结构。将D2-40染色切片整体配准后选择感兴趣区域进行三维重建,可见D2-40染色阳性的管状结构呈柱状分布,而D2-40染色阳性的点状或颗粒状结构呈簇状或团状分布。结论:通过改良川本法的切片及染色技术,克服了切片由于尺度加大所产生的各种不利影响,均获得质量较高的染色切片;结合D2-40对切片图像的二维染色及染色阳性结构的三维重建结果,提示D2-40对于喉癌中管腔样淋巴管的标记具有较高的特异性与准确性,而对于非管腔样淋巴管的标记准确性仍需进一步验证。