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[目的]本课题旨在初步观察不同光剂量以及不同光敏剂浓度分别对产黑普氏菌、牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌的杀灭作用,以及探讨细菌内源性的光敏剂,选择具有最佳的杀灭效果的光剂量,从而为光动力学疗法(Photodynamic therapy, PDT)治疗牙周炎的临床应用提供理论和实验依据。[方法]1.外源性光敏剂组,选用产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica, P. m),牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, P. g)和伴放线放线杆菌(Aggregatibacter actinomycetemcomitans, A. a)的标准菌株为实验菌株,选用甲苯胺蓝氧(Toluidine blue0, TBO)为光敏剂,采用自制LED便携式光源(红光光源,波长630nm,40mW/cm2)。实验中对无菌平板进行半遮光处理,未遮光部分为实验组,遮光部分为对照组。平板中加入含不同TBO浓度(产黑普氏菌组TBO浓度分别为1/μg/ml,2.5μg/ml,5μg/ml,7.5μg/ml,10μg/ml;牙龈卟啉单胞菌组TBO浓度分别为10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml,50μg/ml;伴放线放线杆菌组,TBO浓度分别为10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml,50μg/ml)的培养基,将细菌铺板,采用红光光源对平板照射不同时间后(产黑普氏菌组光剂量分别采用1J/cm2,3J/cm2,9J/cm2;牙龈卟啉单胞菌组光剂量分别采用3J/cm2,9J/cm2,12J/cm2;伴放线放线杆菌组光剂量分别采用3J/cm2,9J/cm2,12J/cm2),培养48-72h,对平板菌落进行计数,将所得数据采用标准化法及配对t检验进行统计学分析。2.内源性光敏剂组,选用产黑普氏菌,牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌的标准菌株为实验菌株,采用自制LED便携式光源(蓝光光源,波长415±10nm,功率40mW/cm2)。实验中对无菌平板进行半遮光处理,未遮光部分为实验组,遮光部分为对照组。平板中加入培养基,将细菌铺板,采用蓝光光源对平板照射不同时间后(产黑普氏菌组光剂量分别采用10J/cm2,20J/cm2,30J/cm2,40J/cm2;牙龈卟啉单胞菌组光剂量分别采用10J/cm2,20J/cm2,30J/cm2,40J/cm2,50J/cm2;伴放线放线杆菌组光剂量分别采用10J/cm2,20J/cm2,30J/cm2,40J/cm2,50J/cm2),培养48-72h,对平板菌落进行计数,将所得数据采用标准化法及配对t检验进行统计学分析。[结果]1.外源性光敏剂组,当光剂量为3J/cm2, TBO浓度为5μg/mL时,产黑普氏菌存活率最小,实验组与对照组存在显著性差异(P=0.01)；当光剂量为9J/cm2TBO浓度为40μg/mL时,牙龈卟啉单胞菌存活率最小,实验组与对照组存在显著性差异(P=0.0005)；当光剂量为9J/cm2, TBO浓度为40μg/mL时,伴放线放线杆菌存活率最小,实验组与对照组存在显著性差异(P=0.001)；2.内源性光敏剂组,当光剂量为20J/cm2时,产黑普氏菌细菌存活率最小实验组与对照组存在显著性差异(P<0.05)；当光剂量为20J/cm2时,牙龈卟啉单胞菌细菌存活率最小为70%,但P>0.5,实验组与对照组不存在显著性差异；当光剂量为40J/cm2时,伴放线放线杆菌细菌存活率最小,实验组与对照组存在显著性差异(P=0.001)。[结论]1.初步获得了外源性光动力疗法对产黑普氏菌,牙龈卟啉单胞菌和伴放线放线杆菌的最佳灭菌效果的光剂量以及光敏剂浓度配伍。2.产黑普氏菌对外源性光动力疗法的敏感性高于牙龈卟啉单胞菌及伴放线放线杆菌。3.在不施加外源性光敏剂,仅依赖细菌的内源性光敏剂时,配合自制光源,内源性光动力疗法于产黑普氏菌,伴放线放线杆菌有明显的杀灭作用,并已初步获得了杀灭产黑普氏菌,伴放线放线杆菌的最佳光剂量。内源性光动力疗法对单一牙龈卟啉单胞菌菌株灭菌效果无统计学意义。4.提示厌氧菌对于内源性光动力疗法比需氧菌更为敏感。