二黄祛脂颗粒对非酒精性脂肪肝小鼠疗效及其机制研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a717878213a
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目的:本研究通过对二黄祛脂颗粒(Erhuang quzhi granules,EQG)、二黄祛脂传统汤剂(Erhuang quzhi traditional decoction,EQTD)的初步药效和其中芦荟大黄素(aloe-emodin,AE)、大黄酸(rhein,RH)、姜黄素(curcumin,CUR)、大黄素(emodin,EM)、大黄酚(chrysophanol,CP)5种成分的含量进行对比,从药理作用和化学成分两方面评价两者的一致性。基于NF-κB/NLRP3信号通路探究EQG治疗小鼠非酒精性脂肪性肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的作用机制。在细胞水平上探究AE、RH、CUR、EM、CP这五种单体对NAFLD的治疗作用,并在动物水平上探究AE、RH对NAFLD小鼠的疗效及其机制。方法:喂养高脂(high fat,HF)饲料建立NAFLD模型,4周后灌胃给予EQG(2.58 g·kg-1)、EQTD(16.25 g·kg-1),治疗4周后收集血清和组织,进行相关血清指标检测和肝脏病理学检查。采用超高效液相色谱—一测多评法,将EM作为内参,建立AE、RH、CP、CUR 4种成分的校正因子,测定、计算并比较EQG与EQTD中这5种成分的含量。通过蛋氨酸胆碱缺乏饲料(methionine and choline deficient diet,MCDD)饮食诱导5周或西方饮食(western Diet,WD)联合CCl4腹腔注射12周构建NAFLD模型,灌胃给予阿托伐他汀(atorvastatin,ATO,7.2 mg·kg-1)、EQG(2.58 g·kg-1),检测小鼠血清指标,进行肝脏病理学检查,并基于NF-κB/NLRP3通路检测肝脏相关m RNA和蛋白表达水平。采用MTT法筛选造模药物游离脂肪酸(free fatty acids,FFA)及治疗药物AE、RH、EM、CP、CUR作用Hep G2细胞的最适浓度,经FFA诱导24 h后分别加入AE、RH、EM、CP、CUR作用24 h后,进行油红O染色,并按照试剂盒要求测定甘油三酯(triglyceride,TG)和总胆固醇(total cholesterol,TC)的含量。建立MCD和WD+CCl4小鼠模型,灌胃给予AE(10 mg·kg-1)、AE(30mg·kg-1)、RH(20 mg·kg-1)、RH(60 mg·kg-1),检测小鼠血清指标,进行肝脏病理学检查,并基于NF-κB/NLRP3通路检测相关蛋白表达水平。结果:对于HF诱导的NAFLD小鼠,EQG和EQTD均能显著降低血清中TC、TG、LDL-C、AST、ALT、MDA的含量(P<0.05),显著提高HDL-C、SOD的含量(P<0.05),HE染色和油红O染色结果表明各给药组的肝组织病理损伤和脂肪分布均减少,比较两者疗效,发现在降低小鼠体重、附睾脂肪系数、血清TG含量方面,配方颗粒疗效更佳(P<0.05)。建立的超高效液相色谱—一测多评法与外标法含量测定结果无显著性差异,且EQG中AE、RH、CP、CUR、EM 5种成分含量高于EQTD。对于MCD饮食和WD+CCl4诱导的NAFLD小鼠,EQG均可显著抑制F4/80的表达(P<0.05),降低MCD小鼠肝组织中NLRP3、NF-κB、IL-1β、TNF-α的m RNA水平和IKKβ、Phospho-NF-κB p65/NF-κB p65、NLRP3及Cleaved caspase-1/caspase-1的蛋白表达(P<0.05),显著降低WD+CCl4小鼠肝组织中NLRP3、IL-1β的m RNA水平和IKKβ、NF-κB p65、NLRP3、ASC、Cleaved caspase-1蛋白表达(P<0.05),上调IκBα蛋白表达(P<0.05)。对于FFA诱导NAFLD细胞模型,油红O染色结果表明各给药组的脂滴分布相比于模型组含量明显减少(P<0.05),TC含量和TG含量相比于模型组也明显降低(P<0.05),其中AE、RH组表现最佳。对于MCD饮食和WD+CCl4诱导的NAFLD小鼠,AE、RH可有效减少小鼠肝细胞中的脂肪沉积和脂肪空泡,显著降低血清中AST、ALT、IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α的含量(P<0.05),抑制肝组织中F4/80、NLRP3、Cleaved caspase-1、IKKβ、NF-κB p65等蛋白表达(P<0.05)。结论:EQG在治疗HF饲料诱导NAFLD小鼠的效果和化学成分的含量上均表现出优于EQTD,且发现EQG可以通过作用于NF-κB/NLRP3信号通路治疗NAFLD小鼠。EQG中AE、RH、EM、CP、CUR这5种成分可以降低TC和TG的含量来改善NAFLD细胞,且AE、RH表现更佳。在动物水平上,AE和RH作用于NF-κB/NLRP3信号改善小鼠NAFLD病理症状,这些均可为EQG在临床上治疗NAFLD提供参考依据。
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