胆管癌(Cholangiocarcinoma)是胆道系统常见的恶性肿瘤，临床症状一般出现较晚，一经确诊，已属中晚期，更由于毗邻门静脉、肝动脉、下腔静脉和胰腺等重要结构，手术切除率低，加上对放疗及化疗的不敏感，病人的预后很差。目前，人们正从多条途径进行研究，以期待改善胆管癌治疗效果。很多研究表明：一些肽类激素如表皮生长因子、胰岛素样生长因子、胃泌素、胆囊收缩素以及生长抑素(somatostatin)对胃肠道恶性肿瘤细胞的生长有调控作用，其中生长抑素是一种作用广泛、对多种消化道恶性肿瘤细胞生长有抑制作用的多肽激素。目前已明确：生长抑素及其类似物是通过与相应的五个不同亚型受体结合而介导其效应，其中生长抑素2型受体在介导抗肿瘤的作用中是一个很重要的受体，它可能通过使肿瘤细胞停滞在G1期或引起细胞凋亡，从而直接抑制肿瘤细胞的增殖；此外，还可能通过抑制激素和生长因子的分泌、抑制血管形成、收缩血管减少肿瘤血供等途径发挥间接的抗肿瘤增殖作用。而且也已确定在人正常胆管上皮细胞中检测出生长抑素受体亚型中只有2亚型的受体表达。本实验通过生长抑素类似物奥曲肽对体外培养的胆管癌细胞株QBC939作用及其可能机制的研究，为生长抑素对胆管癌的临床治疗提供一定的理论依据。 目的 通过生长抑素对胆管癌的抗增殖作用及其可能机制的研究，试图为胆管癌的治疗提供一条新的途径。本实验观察生长抑素对胆管癌细胞株QBC939增殖的影响，并进一步探讨其作用机理。 方法 胆管癌细胞株QBC939体外培养，接种于培养板，加入不同浓度的奥曲肽，采用MTT比色法，肿瘤细胞计数，集落形成实验探讨奥曲肽对QBC939胆管癌安徽医科大学硕士学位论文细胞的增殖是否具有抑制作用;流式细胞仪检测药物作用后的肿瘤细胞阻滞情况和(或)细胞凋亡情况，以及DNA ladder及透视电镜了解药物作用后肿瘤细胞是否出现凋亡;采用RT一PCR法检测QBC939胆管癌细胞株野生型P53基因的表达情况，用Western一b10t方法检测奥曲肤作用前后肿瘤细胞的P53家族的蛋白表达变化。采用统计软件SPSSn.0对所获资料进行统计学分析。计数资料使用卡方检验，计量资料使用方差分析。 结果(1) Octrcotide对体外培养的人胆管癌细胞的生长有抑制作用，并随着药物浓度的增加和药物与肿瘤细胞接触时间的延长而增强。根据实验结果，Oetreotide作用后24、36、48、72和96小时各实验组肿瘤细胞生长率分别为:96.65%、96.38%、95.29%、81.80%和81.30%(0.olmg/L组)，93.12%、92.60%、91.32%、72.19%和70.46%(0.lmg/L组)，93.03%、91.70%、72.29%、51.80%和50.85%(l.omg/L组);各组细胞集落形成率为:70.73%(534/755)(对照组)、8.050，0(61/755)(l.omg/L组)(P<0.001)。(2)流式细胞术显示1 .omg/L Oetreotide连续作用QBC939细胞36小时时细胞周期GO/GI期变化不明显;连续作用48小时后，DNA含量分析显示G0/G1期细胞数量增加，而GZ/M期和S期细胞减少，细胞分裂受抑制;连续作用66小时后实验组细胞出现凋亡峰，呈时间依赖性。(3) DNAladder测定和透射电镜显示1.Om留LOctrcotide连续作用72h，QBC939细胞呈现典型的凋亡特征。 (4) Rl’- PCR测定显示胆管癌细胞株QBC939中野生型p53mRNA无表达或低表达。(5)Western一bloting结果表明1 .omg/L oetreotide作用QBe939细胞前后P73蛋白含量变化无统计学意义。 结论(1)Octreotide对体外培养的QBC939人胆管癌细胞株的生长和增殖有抑制作用，且Octreotide对胆管癌QBC939细胞的作用存在着剂量依赖性和时间依赖性。(2)Octreotide通过诱导QBC939人胆管癌细胞凋亡从而抑制其生长和增殖。(3) octreotide抑制QBC939人胆管癌细胞生长的机理是通过生长抑素2亚型受体介导的并且是通过P53非依赖性机制发挥作用的。