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1目的研究苦杏仁(Semen Armeniacae Amarum)信息物质——可溶性蛋白组分,建立苦杏仁蛋白组分的鉴定方法,为中药信息物质组分鉴定学的建立提供科学数据和技术。2研究内容和方法2.1总蛋白的含量测定采用Bradford法。对苦杏仁类药材、饮片及其不同制剂条件下的可溶性总蛋白进行了含量测定。2.2苦杏仁蛋白的电泳鉴定方法研究采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法。包括对苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳条件(上样量、凝胶浓度、胶片规格、染色方法、脱色程度、凝胶类型)的优选、谱带特征分析、谱带分子量计算、鉴别方法的考察与确定、电泳图谱分析与电泳图谱聚类分析等。2.3苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别方法的适用性研究分别对炮制品(饮片)和不同入药方式剂型的适用性、鉴别方法的可重复性进行了研究。3研究结果3.1苦杏仁类中药总蛋白含量变化规律为:炒制品<生品<燀制品，含量分别为:苦杏仁:杏(Prunus armeniaca L.)(6.76%,11.53%,13.54%);山杏(Prunus armeniaca L. var. ansu Maxim.)(6.18%,9.67%,14.62%)。桃仁:山桃(Prunus davidiana (Carr.) Franch.)(9.75%,16.81%,17.90%);桃(Prunus persica (L.) Batsch)(9.59%,17.75%,16.28%);甜杏仁:李光杏(A. vularis var. glabras. X. Sun)(7.52%,11.88%,12.73%)。3.2苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的最佳电泳条件为:凝胶浓度:浓缩胶C=2.6%,T=3.9%;分离胶C=2.6%,T=12%;上样量:20μg(考马斯亮蓝R-250染色),10μg(银染色);恒压电泳U=150V;冷凝回流条件下电泳时效果最佳。3.3确定苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳谱带特征:结合考马斯亮蓝染色和银染色结果,蔷薇科李属的9个种子类供试品,SDS蛋白电泳图共得到39条迁移率不同的谱带,按分子量大小不同,可大致划分为三个特征区组,即高分子量组A(60 kDa~105 kDa)、中分子量组B(29 kDa~59 kDa)和低分子量组C(10 kDa~28 kDa)。其中各供试品在B、C组内均有3~4条高含量谱带,此二组谱带的具体数目、位置及深浅度显示明显差异,具有鉴别意义。具体鉴别特征的应用可通过分种检索表形式加以实现。3.4得到苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱:电泳图谱中特征峰主要集中在44 kDa ~55 kDa和21 kDa ~24 kDa两区域内,为苦杏仁类供试品电泳图谱的共有特征;而各供试品在此两组特征峰处的具体峰数目、位置和峰强显示出明显差异,为苦杏仁类供试品电泳图谱的主要鉴别特征区。3.5蛋白质电泳图谱聚类分析结果与植物系统分类基本一致。3.6炮制和制剂过程对苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳高含量谱带影响不显著。因此,在中药品种层次上,炮制方法的改变,或一般制剂工艺过程理论上不影响对中药饮片蛋白组分的鉴别。对具体含苦杏仁中药的制剂的电泳鉴别方法的实践表明:在单制剂中蛋白电泳鉴别法可行,且不受炮制过程影响;在复杂制剂中,可用于桃仁杏仁来源中药的鉴别。4结论4.1蛋白质类成分为苦杏仁类中药主要组分之一,燀制后的饮片总蛋白含量略有增加,炒制后的饮片总蛋白含量减少,电泳结果显示饮片中低含量谱带明显少于药材。4.2 SDS-凝胶电泳谱带(图谱)特征为:苦杏仁类中药蛋白质SDS-凝胶电泳在44 kDa ~55 kDa和21 kDa ~24 kDa两区域内均出现3~4条高含量谱带(峰),为苦杏仁类中药的电泳图谱特征区。依据各供试品特征区内谱带(峰)的具体数目、位置、深浅程度(峰强)等数据,可进行品种鉴别。电泳鉴别法可作为苦杏仁类中药品种的鉴别方法。4.3蛋白质电泳图谱聚类分析结果与系统分类基本一致,即该蛋白组分是特征性组分,为将SDS-电泳鉴别法作为苦杏仁类中药的鉴定方法提供了理论依据;为品种判断的归类提供了定量依据。4.4苦杏仁类中药SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴别方法适用于药材的鉴定、对饮片及其复方制剂的鉴别有一定实用性。5创新点5.1确定了苦杏仁特征蛋白组分。5.2建立了苦杏仁蛋白SDS-凝胶电泳特征的鉴别检索表。5.3建立了苦杏仁蛋白SDS-凝胶电泳鉴别方法。