拟南芥AtASM1基因的鉴定及功能研究

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自然界中的植物有着“固着生长”的特性,与动物的“趋利避害”反应有所不同。因此植物一生中几乎难以避免受到不良环境的侵袭。尤其是农作物,当受到不良环境胁迫时,会导致减产减收,甚至绝产绝收。面对外界环境的各种威胁,植物本身也进化出各种适应机制来抵抗或降低各种威胁,其中植物激素脱落酸(ABA)相关信号途径在植物抵抗环境胁迫过程中发挥着重要的作用。由于生命过程的复杂性,关于ABA参与的信号途径仍有许多难题未解决。本研究通过筛选Ac/Ds突变体库,获得一个ABA敏感突变体asm1(ABA Sensitive Mutant1),发现其在子叶变绿阶段对ABA敏感、萌发及根的生长不受ABA影响。Tail-PCR检测发现转座子Ds插在基因At5g47580内部,造成该基因转录失活。AtASM1基因是一个植物特有的基因,在顶端分生组织、维管组织、下胚轴与根相交处、侧根原基处特异表达。蛋白结构预测分析显示AtASM1基因编码的蛋白含有八个跨膜域结构,细胞生物学及生化分析表明该蛋白定位在内质网膜上。体外泛素化实验证明该蛋白可以被泛素化。通过对该基因突变体的进一步分析发现asm1突变体对活性氧(ROS)供体百草枯(Paraquat)超敏感,用ABA、Paraquat分别同时处理突变体和野生型,NBT、DAB染色检测到突变体相对于野生型,体内超氧自由基积累增加、过氧化氢积累减少,ROS的稳态被打破。NorthernBlot检测ROS清除的相关基因,发现过氧化氢清除剂(CAT)在突变体中的表达会有一段更长的时期维持在较高的水平,可能因此造成了突变体体内ROS稳态被破坏。而且ABA处理会造成突变体体内呼吸爆发氧化酶同系物(AtRbohD)的上调高于野生型,以致产生更多的ROS信号,这有可能就是突变体内ABA影响ROS信号的作用点。另外我们对突变体做了基因芯片分析,发现Paraquat处理后突变体体内有一个氧化胁迫相关基因表达上升,有研究指出,该基因在拟南芥体内过表达会增强拟南芥清除过氧化氢的能力。另外还发现衰老相关的基因表达量升高,提示我们拟南芥AtASM1的突变可能会到影响衰老、细胞程序性死亡相关机制。我们还发现asm1突变体对葡萄糖、甘露醇模拟的渗透胁迫表现出敏感。这些结果表明,AtASM1在ABA影响ROS产生和清除的过程中,发挥了重要的作用。
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