免疫治疗是继手术治疗、放疗、化疗之后肿瘤治疗的新方法，其技术、方法同趋成熟，治疗过程的安全性逐步提高。但是如何进一步提高治疗效率、降低复发率及各种并发症，提高患者生存质量已成为肿瘤免疫治疗领域的一项重要研究内容。树突状细胞(DC)是目前已知的功能最强的抗原递呈细胞(APC)，它具有强大的T细胞激活能力，并能活化初始型T细胞。它不仅能够激活自体的抗肿瘤免疫，同样能够提高异体的抗肿瘤效应，基于此，DC的抗肿瘤免疫治疗已在临床上开始应用，显示出广泛的前景。因为大部分病人和复发者的肿瘤组织和细胞的获取较为困难，目前的方法难以广泛有效地开展DC的免疫治疗。而RNA可以在体外进行扩增，再利用脂质体转染DC能较好地解决该问题，但是否会影响DC的诱导分化和功能，和其他方法相比，肿瘤杀伤效应如何，需要进一步探讨。本文实验第一部分我们采用了外周血干细胞作为前体细胞，联合应用IL-4，GM-CSF和TNF-α诱导DC分化成熟，采取肿瘤细胞冻融抗原和脂质体转染肿瘤细胞总RNA两种方式负载DC，继续培养至2周，光镜和扫描电镜观察细胞形态，流式细胞仪检测DC表面标志，以此来鉴定培养的DC。第二部分实验中，我们用尼龙毛柱法分离健康人外周血T细胞，与不同方式负载抗原的DC共培养后诱导产生特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)，流式细胞仪检测CTL的CD3、 CD4和CD8的阳性率，用乳酸脱氢酶(LDH)方法体外测定CTL杀伤肿瘤细胞的效率，比较冻融肿瘤抗原负载DC和转染肿瘤细胞总RNA的DC所诱导出的CTL杀伤肿瘤的差异。在第一部分实验中，观察光镜下的DC在培养过程中，悬浮细胞逐渐增多，细胞体积增大，负载抗原的DC和未负载抗原的DC培养至第14天均具有典型的DC细胞形态，扫描电镜可见细胞体积大，表面突起众多，使细胞整体呈现星形或树突状外观。经冻融抗原负载和转染肿瘤细胞总RNA的DC，2周时检测细胞表型，高表达CD83和CD1a，高表达共刺激分子CD80和CD86，低表达CD14，而且，负载抗原组DC和未负载组收获时CD83和CD1a的百分率无明显差别，表明这两种方法负载抗原给DC并不影响DC的分化和成熟。 中文摘要 同时体外杀伤实验中我们观察到:经过抗原负载的DC刺激T细胞后，CDS+细胞明显比未负载DC刺激的T细胞高;转染组DC刺激的CTL比冻融抗原组杀伤肿瘤细胞的效应强，随着效靶比增加，差异越明显，而且转染RNA所使需的肿瘤细胞和用于冻融的肿瘤细胞相比，前者比后者数量少。 通过本研究，得出的结论:脂质体转染肿瘤细胞总RNA给DC不影响DC的分化成熟和功能，而且该方法介导的CTL杀伤肿瘤效应比肿瘤冻融抗原负载DC介导的CTL杀伤肿瘤效应强，另外，转染所需的肿瘤细胞数量少。