背景环状RNA(circRNA)是动植物细胞中的一种非编码RNA,由于其环状结构使得其免于被核酸外切酶RNase R处理降解。20世纪70年代末,研究人员通过电子显微镜首次发现RNA可以以环状的形式存在于真核细胞的细胞质中,随后Arnberg等在酵母的线粒体中又发现了 circRNA的存在。但是circRNA长期被视为细胞内无意义的副产物,是RNA剪接过程中产生的无用物的存在。20世纪90年代,科研人员又陆陆续续发现一些由外显子剪接而来的circRNA分子,但由于其含量较低,依旧被认为是由于外显子错误剪接而产生的。但随着测序技术的发展,大量的circRNA分子映入人们眼帘。研究表明,circRNA在转录组中占有相当大的的比率,绝大多数circRNA分子来源于外显子剪接,少数由内含子或内含子、外显子共同构成,且绝大多数circRNA在进化上具有保守性,组织分布具有明显的差异性。目前,越来越多的研究表明circRNA在人类疾病的发生和发展过程中具有重要的功能。卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,在发病率上目前仅次于子宫内膜癌和宫颈癌,但死亡率却超过子宫内膜癌和宫颈癌之和,占各类妇科肿瘤的首位。卵巢癌患者的5年生存率与分期直接相关。Ⅰ期5年生存率约为90%,Ⅱ期生存率约为80%,Ⅲ期(15%～20%)和Ⅳ期(5%)急剧下降。卵巢癌发病早期通常是可以治愈的,但是由于卵巢癌发病早期无明显症状,因而卵巢癌发现时间相对较晚。这些原因导致寻找用于卵巢癌诊断和预后预测的潜在生物标志物和新的治疗靶点的任务更加迫切。目前,一些lncRNA和miRNA在卵巢癌患者中的异常表达已被证实在临床中具有潜在的应用前景。相比lncRNA,circRNA在细胞中更加稳定,且保守性更强。目前的研究表明,circRNA有作为肝癌等肿瘤临床诊断标志物和靶点的潜在可能。而circRNA在卵巢癌中是否拥有临床应用前景仍有待进一步研究。卵巢癌的发生发展与BRCA1密切相关。BRCA1是一种抑制恶性肿瘤发生的基因,位于人的第17号染色体上。在调节人体细胞的复制、DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用。KLF4是一类锌指转录因子,参与调控细胞的增殖、分化、凋亡和上皮细胞-间充质转化。研究表明,KLF4在卵巢癌中行使抑癌基因的功能。DNAJB6是一类上皮细胞-间充质转化相关基因,有多种转录变体,是涉及广泛细胞事件的两种主要类型的分子伴侣之一。其中DNAJB6 variant 1在多种癌症中均起到抑癌基因的作用。卵巢癌的发生常常伴随着AKT1及其相关通路的异常激活。MK-2206是一种高度选择性的AKT1/2/3抑制剂,属于变构抑币制剂,由pleckstrin同源结构域激活。MK-2206可以抑制Akt的苏氨酸308位点和丝氨酸473位点的自身磷酸化作用。另外,MK-2206可以阻止Akt调节的下游信号分子(包括TSC2,PRAS40,及核糖体S6蛋白)的磷酸化作用。目前,MK-2206是第一个进入临床研究阶段的Akt小分子变构抑制剂,已进入临床二期。研究表明,MK-2206具有较广泛的临床联合用药前景。MK-2206是否在卵巢癌治疗中存在潜在应用价值也有待进一步研究。目的探索circRNA在卵巢癌中的潜在功能和作用机制,以期寻找到新的卵巢癌临床诊断的标志物和治疗癌症的靶点。材料与方法本研究初期,我们收集了 5个卵巢癌病人的肿瘤组织样本和5个其他卵巢良性疾病病人的正常卵巢组织样本,通过构建cDNA文库进行了 RNA测序。利用高通量测序结果筛选了在卵巢癌组织样本和正常卵巢样本中显著差异表达的circRNA分子。通过RNAscope技术在88个有临床预后资料的卵巢癌病人的石蜡切片中进行circPLEFKHM3的表达水平检测,进行了生存分析;随后,我们在卵巢癌细胞中进一步通过敲低和过表达circPLEKI IM3进行了 circPLEKHM3的功能验证和机制探究;裸鼠皮下接种circPLEKHM3稳定敲低卵巢癌细胞株和对照组细胞观察两组的肿瘤生长速度差异;使用MK-2206和紫杉醇联合用药对circPLEKHM3稳定敲低卵巢癌细胞株和对照组细胞进行联合治疗。结果1.circPLEKHM3在卵巢癌组织中表达量相比卵巢正常组织显著降低。2.生存分析结果显示,卵巢癌患者circPLEKHM3的表达水平与预后显著相关,circPLEKHM3的表达水平越低预后越差。3.功能上,过表达circPLEKHM3后细胞增殖和迁移明显变慢,上皮细胞-间充质转化(EMT)减少;敲低circPLEKHM3后细胞增殖和迁移明显变快,上皮细胞-间充质转化(EMT)增加。4.circPLEKHM3和miR-9存在直接的相互作用,miR-9可以靶向性作用BRCA1、KLF4、DNAJB6,影响 BRCA1、KLF4、DNAJB6 的表达。5.敲低circPLEKHM3会激活AKT1,过表达circPLEKHM3会抑制AKT1的磷酸化。6.MK-2206不仅对circPLEKHM3的缺失导致的卵巢癌细胞恶性增殖有更明显的抑制作用,而且与卵巢癌的临床用药紫杉醇具有协同作用。结论1.circPLEKHM3的表达可能与卵巢癌的发生有关,卵巢癌患者circPLEKHM3的表达水平极有可能影响卵巢癌的发病进程,circPLEKHM3具有作为卵巢癌临床诊断的标志物的潜力。2.circPLEKHM3在体内体外模型中均起到抑癌因子的作用。3.circPLEKHM3 可以通过吸附 miR-9 促进 BRCA1、KLF4、DNAJB6 的表达,抑制AKT1的表达。4.MK-2206在卵巢癌的临床联合用药中具有潜在价值,这可能与circPLEKHM3在卵巢癌中低表达有关。