论文部分内容阅读
目的：探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocathechin-3-gallate,EGCG）诱导口腔鳞癌Tca8113细胞凋亡及其可能机制研究。以期为EGCG在口腔鳞癌预防和治疗中提出理论依据。方法：不同剂量的EGCG（0、25、50、75、100、125mg/L）分别作用Tca8113细胞24h、48h、72h,MTT法观察该药物对Tca8113细胞生长的影响，并计算细胞增殖抑制率。倒置显微镜下观察EGCG（0、50、75、100mg/L）处理48h后Tca8113细胞的形态学变化。AO/EB荧光染色法检测不同剂量的EGCG（0、25、50、75、100mg/L）分别作用Tca8113细胞48h后荧光显微镜下细胞的形态学变化。Hochest33258染色法检测不同剂量EGCG（0、25、50、75、100、125mg/L）对Tca8113细胞凋亡的影响。流式细胞仪检测EGCG（0、50、75mg/L）干预48h后Tca8113细胞周期的改变。透射电镜下观察加药组与阴性对照组之间的区别，其中加药组是否出现凋亡现象。免疫细胞化学SABC法检测不同浓度的EGCG（0、25、50、75、100、125mg/L）干预48h后，caspase-3、caspase-8蛋白在Tca8113细胞中的表达差异。结果：MTT法检测结果显示，不同剂量的EGCG（25、50、75、100、125mg/L）均能抑制口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖，其中（50、75、100、125mg/L）与对照组比较差异有统计学意义（p<0.05），细胞增值抑制率随着EGCG浓度的增加和作用时间的延长而升高，呈现出明显的时间-剂量效应关系。倒置显微镜下可见对照组的Tca8113细胞呈梭形或多边形贴壁生长，数量密集，轮廓清楚，细胞间连接紧密。加药组的Tca8113细胞随着EGCG浓度的增加，贴壁的细胞数量明显减少，折光性差，部分细胞变圆、皱缩并漂浮于培养基中。AO/EB荧光染色法显示，不同浓度的EGCG干预Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学变化，与对照组比较，随着EGCG浓度的增加，凋亡细胞数不断增加。Hochest33258染色显示，不同浓度的EGCG干预Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核浓缩、核碎裂等。与对照组比较，随着EGCG浓度的增加，凋亡细胞数不断增加（n=5,p<0.01）。分别采用不同浓度EGCG（0、50、75mg/L）处理Tca8113细胞48h后通过流式细胞仪进行细胞周期分析，结果显示EGCG（50、75mg/L）处理组G1期细胞百分数分别为41.997±0.17和65.24±0.632，与对照组（未加药组）比较具有显著性差异（p<0.01），表明EGCG诱导Tca8113细胞G1期阻滞。透射电镜下发现与对照组相比，加药组（75mg/L）出现典型的凋亡改变。免疫细胞化学检测结果显示，EGCG能上调Tca8113细胞中caspase-3、caspase-8蛋白的表达，且呈浓度依赖关系。不同浓度的EGCG（0,、25、50、75、100mg/L）干预Tca8113细胞48h，caspase-8蛋白的平均光密度（AOD）值分别为：0.131±0.04、0.177±0.019、0.223±0.06、0.376±0.074、0.571±0.085，各加药组与空白对照组相比差异有统计学意义（p<0.01），caspase-3蛋白的平均光密度（AOD）值分别为：0.096±0.072、0.118±0.049、0.197±0.081、0.343±0.033、0.653±0.065，各加药组与空白对照组相比差异有统计学意义（p<0.05）。结论：EGCG能有效地抑制Tca8113细胞的增殖，诱导其凋亡，其机制可能与上调caspase-8、caspase-3的表达有关。