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目的:研究XPO1抑制剂Selinexor（KPT-330）单药以及与地西他滨联合用药对于弥漫性大B细胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL）的增殖抑制作用,并初步探究了 DLBCL细胞中KPT-330的耐药性,从而更加全面的探讨KPT-330在抗DLBCL中的作用及机制。方法:1.选取 GEO（Gene Expression Omnibus）数据库中的 GSE10846 数据集,分析XPO1的表达与患者预后的关系;采用单因素分析与多因素分析评估XPO1的表达量在DLBCL中的预后价值;评价XPO1表达量的纳入对NCCN-IPI预后模型的影响。2.采用 CCK8 法检测 KPT-330 对人 DLBCL 细胞株:SU-DHL-2,SU-DHL-8 和Farage的增殖抑制作用,并用GraphPad计算出各半数抑制浓度（IC50）。3.选取NOD-SCID小鼠建立人淋巴瘤细胞系异种移植模型,分别以20mg/kg KPT-330或0.5%羧甲基纤维素钠溶液灌胃,给药7次后,测量肿瘤体积,评价KPT-330 对小鼠 DLBCL 肿瘤生长的影响。4.采用CCK-8检测KPT-330与地西他滨或西达本胺联用对DLBCL细胞株的增殖抑制作用,用Calcusyn 2.0计算出联合指数（Combination Index,CI）从而筛选出与KPT-330有协同作用的药物,并检测联合用药对DLBCL细胞周期与凋亡的影响。5.采用非标记定量（Label-free）蛋白质组学的方法检测未加药处理及使用KPT-330 处理 6h 后 DLBCL 细胞蛋白表达情况,筛选出加药组与未加药组表达量发生变化的差异蛋白,挑选出可能与地西他滨具有相同作用靶点的蛋白,进而用Western blot的方法进行验证。6.建立KPT-330获得性耐药的SU-DHL-8淋巴瘤细胞株,用Western blot法分别检测不同耐药浓度的SU-DHL-8细胞株、对KPT-330较敏感的野生型SU-DHL-8细胞株以及较耐药的野生型Farage细胞株中XPO1的蛋白表达情况。7.Western blot法检测使用KPT-330处理后SU-DHL-8与Farage细胞株中TP53的蛋白表达情况。结果:1.GSE10846数据集中414例患者的生存分析结果表明,XPO1的高表达与DLBCL患者的预后不良相关,单因素与多因素的分析结果均提示:XPO1的表达量可以作为独立的DLBCL预后评价因子,并且可以增加NCCN-IPI的预后评价效能。体外研究结果显示:KPT-330能够显著抑制人DLBCL细胞株SU-DHL-8,SU-DHL-2和Farage的增殖,各细胞株的IC50分别为573nM,373nM,1.28μM。2.体内研究结果显示:KPT-330治疗组小鼠瘤荷较小,提示KPT-330在体内具有抑制DLBCL肿瘤生长的作用。3.联合用药的药物筛选结果显示,地西他滨与KPT-330在三株淋巴瘤细胞株中均具有良好的协同作用。与KPT-330单药相比,地西他滨与KPT-330的联用显著增加了细胞凋亡水平。在SU-DHL-8细胞株中,联合用药没有使细胞显著阻滞于某一周期;而在Farage细胞株中,联合用药显著增加了阻滞在细胞G1期的百分比。4.SU-DHL-8细胞株的定量蛋白质质谱及Western blot验证结果显示,KPT-330作用于细胞后DNMT1蛋白表达增加。进一步Western blot结果显示,地西他滨作用于细胞后DNMT1蛋白表达降低,地西他滨与KPT-330联用后DNMT1蛋白表达降低。5.Western blot结果显示,随着SU-DHL-8细胞株对KPT-330耐药浓度的增加,XPO1的蛋白表达增加。但在对KPT-330较耐药的Farage细胞中,XPO1的表达水平比对KPT-330较敏感的SU-DHL-8细胞低。6.定量蛋白质质谱及Western blot验证结果显示,使用KPT-330处理细胞6h后,Farage细胞中TP53的表达增加,而SU-DHL-8细胞中TP53的表达未发生改变。结论:KPT-330在体内外对DLBCL的增殖具有显著的抑制作用;在与地西他滨的联用中显示出协同抑癌及显著增加细胞凋亡水平的作用。在Farage细胞株中的药物联用会使细胞周期阻滞于G1期,而SU-DHL-8细胞株中的药物联用机制可能与共同靶向DNMT1有关。SU-DHL-8获得性耐药细胞株的耐药机制可能与XPO1的表达增加有关。