胸膜肺炎放线杆菌四川分离株的生物学特性研究

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胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)能够引起猪患传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP),给我国乃至全球养猪业带来了重大损失。本研究进行了APP的分离鉴定及其生物学特性研究,主要研究如下:从来自四川广安、眉山等地区疑似病料中进行APP分离,经分离培养、溶血现象、“卫星’现象、染色镜检、PCR、生化特性等鉴定,共分离获得9株胸膜肺炎放线杆菌(分别命名为SC-GA.SC-MS1~SC-MS8).对分离株进行PCR鉴定均能扩增出大小约422bp的目的条带;对分离株分别提取酚水抗原同标准阳性血清做琼扩血清型鉴定,分离自广安病猪关节积液的SC-GA株为血清7型,分离白眉山病猪的脾脏SC-MS5株、肺脏SC-MS1.SC-MS2.SC-MS3.SC-MS4.SC-MS6.SC-MS7.SC-MS8等7株均为血清1型。分别对9株分离株进行药物敏感试验的研究,结果表明9株分离株均对庆大霉素、卡那霉素、四环素、林可霉素、红霉素耐药;均对诺氟沙星、环丙沙星等喹诺酮类,头孢唑林、头孢哌酮/舒巴坦等头孢类,以及氟苯尼考、阿莫西林等敏感;除SC-GA外,其他分离株均对青霉素G敏感;除SC-GA.SC-MSI外,其他分离株均对氨苄西林敏感SC-GA对青霉素G、氨苄西林耐药。本研究揭示临床对APP的预防和治疗用药,应选择青霉素类、头孢类、喹诺酮类等,避免使用氨基糖苷类和大环内酯类药物。对分离株之间毒力大小进行比较研究,发现血清1型分离株毒性明显比7型分离株强,且1型分离株之间毒性也有较大差异。选取一株毒性最强1型分离株(SC-MS5)和一株血清7型分离株(SC-GA)分别进行了毒力测定研究。测定分离株对小鼠的半数致死量,并观察对小鼠的致病性。研究结果表明SC-MS5株和SC-GA株对小鼠均有较强的致病性,其中SC-MS5株的半数致死量为5.4378×107CFU,SC-GA株的半数致死量为1.9543×108CFU。2株分离株均能引起小鼠产生明显的胸膜肺炎症状及病理变化:呼吸困难、精神萎靡:肺脏出血、粘连,脾脏淤血肿大等。利用SC-MS5 1型株和SC-GA7型株制备灭活苗对小鼠进行免疫,免疫结束后1 4d对小鼠进行10LD50攻毒。检测首免前、二免前、攻毒前血清的抗体水平,发现免疫后血清抗体水平明显上升,且二免后上升明显。在对小鼠的保护方面,SC-GA7型分离株灭活苗对自身的免疫保护率为66.7%,SC-MS51型分离株灭活苗对自身的免疫保护率为83.3%;二价苗对各自的保护率均为83.3%。结果表明,分离株具有较好的免疫原性。本研究对丰富四川地区APP的病原学资料及猪传染性胸膜肺炎临床防治用药提供科学依据,对四川地区APP的防治具有一定临床实际指导意义。
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