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漆树科植物南酸枣(Choerospondias axillaris(Roxb.)Burtt et Hill)广泛分布于我国的西藏、广西、云南和贵州等地,东南亚地区也有分布,其干燥果实称为广枣。广枣中大量的黄酮类成分被认为是有效成分,具有多种生理活性。然而,目前对广枣黄酮的研究多集中于其药理活性方面,少见其化学成分及生物活性的研究报道。本课题的研究包括四个部分:(1)通过单因素试验(包括乙醇体积分数、液料比、提取温度、提取时间和微波功率五个因素)和响应面法优化微波辅助提取广枣中黄酮类物质的最佳工艺条件。结果表明,微波辅助法提取广枣黄酮的最佳条件是:提取温度75℃、液料比62:1、乙醇体积分数62%、微波功率500 W和提取时间7 min。在此条件下,广枣黄酮的得率为16.41%。(2)通过动态法对样品液流速、样品液pH、洗脱液流速和洗脱液乙醇体积分数对AB-8型大孔树脂纯化效果进行研究,利用制备色谱对广枣黄酮进行分离。实验结果证明,AB-8型大孔树脂纯化广枣黄酮的最优工艺参数为:样品液流速2 BV/h、样品液pH2、洗脱液流速3 BV/h、洗脱液乙醇体积分数60%,在此条件下广枣黄酮纯度由28.5%增加到67.3%。采用高效液相色谱法分析分离纯化的效果,显示制备色谱将广枣黄酮分离为两个组分(F1和F2),能够用于广枣黄酮的初步分离。(3)采用液相色谱-飞行时间质谱串联(LC-Q-TOF-MS)结合液相色谱-三重四级杆质谱串联(LC-QQQ-MS/MS)对广枣中的黄酮类化合物进行定性分析,采用液相色谱-三重四级杆质谱串联进行定量实验。通过对比标准品或相关文献的保留时间及质谱碎片鉴定出10种酚酸类物质和5种黄酮类物质。利用液相-三重四级杆串联质谱(LC-QQQ-MS/MS)在多反应监控模式(MRM)下,分别测定了黄酮化合物的含量,F1中6种成分的含量分别为:奎宁酸(399.76±16.69μg/g),柠檬酸(874.26±24.13μg/g),没食子酸(1313.32±46.85μg/g),绿原酸(14.39±0.34μg/g),儿茶素(27.31±0.27μg/g)和原儿茶酸(1282.53±52.63μg/g);F2中11种成分的含量分别为:儿茶素(117.18±3.44μg/g),原儿茶酸(18407.81±260.39μg/g),牡荆素(12.52±0.29μg/g),1-咖啡酰奎宁酸(148.12±5.90μg/g),异槲皮苷(45.16±1.16μg/g),鞣花酸(806.50±28.12μg/g),槲皮苷(484.83±20.39μg/g),紫云英苷(60.00±0.80μg/g),甲基鞣花酸(583.84±14.87μg/g),二甲基鞣花酸(662.41±16.62μg/g)和异鼠李素(46.31±0.53μg/g)。(4)分别测定广枣黄酮、F1和F2的总抗氧化能力、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、羟自由基(·OH)以及超氧阴离子自由基(O2-·)的能力,并与常见的抗氧化剂抗坏血酸(Vc)进行了对比。此外,利用细胞模型法初步评价了广枣黄酮的细胞内抗氧化活性。结果显示,广枣黄酮具有良好的抗氧化效果,总黄酮的抗氧化性介于F1和F2之间;F1对DPPH自由基的清除能力以及F1和F2对羟自由基的清除能力均高于Vc,而在总抗氧化能力以及清除超氧阴离子方面F1和F2均低于Vc;广枣黄酮在1~500μg/mL的浓度范围内对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)无毒性,且表现出明显的抗氧化能力。