目的 先天性马蹄内翻足(congenital clubfoot,CCF)是小儿骨科常见的严重影响患儿足部形态和功能的畸形,其发病率约为1‰,男孩为女孩的二倍,单侧稍多于双侧。临床主要表现为:前足内收、跟骨内翻、踝关节马蹄位多合并胫骨内旋。多年来,关于本病的病因学研究虽取得一些成果,但仍无定论,多集中在神经肌肉病变、基因异常、软组织挛缩、原始骨基发育异常等方面。目前较为推崇的是神经肌肉病变学说,认为CCF的原发病理改变是肌力不平衡,而足部骨骼异常及软组织挛缩等病理改变是继发性的。本研究将胎儿外科、显微外科和显微注射技术相结合,并建立先天性马蹄内翻足大鼠动物模型,应用逆行性神经示踪的方法,研究CCF胎鼠后肢腓肠肌脊髓运动神经元的变化,为CCF的病因研究提供客观依据。 方法 实验共采用雌性Wistar大鼠29只,按雌雄比例为4:1行午夜合笼,次日晨8时行阴道涂片,确定受孕情况随机分为实验组(RA致畸组)15只和对照组14只。在孕10日,RA致畸组按120mg/kg体重称取全反式维甲酸(all trans-Retinoic acid,at-RA),按40mg/ml于矿物油中混匀,经灌胃器一次注入孕鼠胃内。对照组于相同时间仅将与实验组同剂量但不含at-RA的矿物油经灌胃器注入孕鼠胃内。雌鼠孕20日行胎儿外科手术,用显微注射的方法将5%的荧光金(fluorogold,FG)注射到正常胎鼠和先天性马蹄内翻足胎鼠后肢小腿腓肠肌中行逆行性神经示踪。术后孕鼠存活24小时取出胎鼠经左心室穿刺注入0.9%氯化钠灌洗,再注入4%多聚甲醛固定,显微镜下取出胎鼠腰骶段脊髓,行冰冻切片,在荧光显微镜下观察脊髓