【摘 要】
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背景和目的:端粒是真核细胞线性染色体末端特殊的DNA-蛋白质复合体结构,有维持染色体稳定和基因组完整的功能,能随细胞的分裂不断缩短,直至染色体丢失,融合,重组和降解,发生
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背景和目的:端粒是真核细胞线性染色体末端特殊的DNA-蛋白质复合体结构,有维持染色体稳定和基因组完整的功能,能随细胞的分裂不断缩短,直至染色体丢失,融合,重组和降解,发生细胞凋亡,因而被称为细胞分裂的“生物钟”。端粒酶是一种逆转录酶,能以自身的RNA为模板合成端粒的DNA重复序列(5-TTAGGG-3)n加在染色体末端,维持端粒长度,使细胞发生永生化或变成癌细胞。端粒酶由六部分组成:人端粒酶RNA(human telomerase RNA,hTR),端粒酶相关蛋白(telomerase-associated protein,TP-1),人端粒酶逆转录酶(human telomerase-reverse transcriptase,hTERT),热休克蛋白90(heat shock protein,hsp90),分子伴侣(p23)和全酶组装因子(dyskerin)。研究表明hTERT是端粒酶主要组成部分之一,在80%-90%的肿瘤组织中阳性高表达,与端粒酶活性有高度相关性,是端粒酶活性的限速因子。因而hTERT就成为端粒酶活性抑制和肿瘤治疗的理想靶点。RNAi是一种由同源dsRNA引导的靶mRNA降解的转录后基因沉默表达机制,由Fire 1998年首次在线虫体内发现该现象,后来研究表明这是一种从低等植物到高等哺乳动物普遍存在的高度保守的防御保护机制,RNA干扰技术是一门新兴基因沉寂技术,是通过加强关键基因的RNAi机制,控制疾病中出现异常的蛋白合成进程或外源致病核酸的复制及表达。在近来的研究中RNAi技术以高效性、特异性显示出比其他基因治疗手段如基因敲除、反义核酸和核酶技术的优越性,掀起了一场新的基因治疗革命,具有可观的临床研究和应用前景。本实验我们以hTERT为作用靶点,运用RNAi技术,将能表达hTERT-siRNA的质粒载体转染K562细胞,旨在探索有效降解hTERT mRNA、抑制端粒酶活性的siRNA序列,观察质粒载体诱导RNAi维
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