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Galectin-1为半乳糖凝集素(galectin)家族的重要成员之一，由135个氨基酸组成，与β-半乳糖苷具有特殊亲和力，常以单体和同源二聚体形式存在，表达于多种类型的细胞，在胸腺、平滑肌、肾脏、心肌、骨骼肌中含量丰富，具有重要的生物学功能。在神经系统中，Galectin-1参与系统发育并调节神经细胞的增殖。在免疫系统中，Galectin-1诱导胸腺细胞和活化的T细胞的凋亡从而对T细胞进行调节，并抑制炎性因子的分泌。在某些肿瘤组织中发现Galectin-1高表达，普遍参与肿瘤的发生、迁移、黏附，肿瘤血管的生成。 目前大量研究表明Galectin-1可以预防和治疗多种自身免疫性疾病，具有广阔的临床应用前景。然而，相关的动物模型实验必须给予相对高浓度的Galectin-1才能得到理想的结果。若应用于人体，则每天的剂量相当于4mg/kg，这样大的剂量无疑给Galectin-1应用于临床带来了困难。因此，如何提高Galectin-1的活性已成为其应用于临床急需解决的问题。 文献报道在体内，二聚体Galectin-1在维持免疫系统稳态过程中较单体Galectin-1具有更高的活性。而且，PatrickBttig等将两个Galectin-1基因串联在一起，表达的二串体重组蛋白在诱导鼠类胸腺细胞和成熟T细胞凋亡试验中比天然的单体Galectin-1表现出更强的诱导凋亡活性。因此，本课题拟采用类似设计方案，表达单体和二串体Galectin-1，筛选高活性蛋白。 为了实现上述目的，首先本课题以含有Galectin-1基因的质粒pACT-Gal-1为模板，利用PCR技术获得单体Galectin-1基因及二串体Galectin-1基因，并选择带有his标签的质粒pQE-30和本教研室改构的不含his标签的表达质粒pET-22b(+)为表达载体，通过双酶切后，将基因与表达载体相连接，构建含有Galectin-1基因的重组质粒，分别转化大肠杆菌M15和BL21(DE3)感受态细胞，构建工程菌。然后，经IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析目的蛋白表达情况，再经Ni柱亲和层析及阴阳离子交换等不同层析方法纯化目的蛋白。最后，通过红细胞凝集试验和Jurkat细胞增殖抑制试验检测纯化所得目的蛋白的生物活性。 本课题通过对以上三方面的研究，共获得如下结果： 1)成功构建了M15/pQE-30-Gal-1、BL21/pET-22b(+)-Gal-1、BL21/pET-22b(+)-Gal-1②工程菌，双酶切鉴定和基因测序结果均正确。 2)通过Ni柱亲和层析得到纯度大于95％的His-Gal-1蛋白；通过Q阴离子交换层析和SP阳离子交换层析纯化得到纯度约为90％的Gal-1蛋白和二串体Gal-1②蛋白，Westernblot结果显示均为预期目的蛋白。 3)三种重组蛋白均有红细胞凝集活性和抑制Jurkat细胞增殖活性，且二串体Gal-1②蛋白较His-Gal-1和Gal-1蛋白表现出了更强的生物活性。 综上所述，我们得到了高活性的Gal-1②重组蛋白，有望成为治疗自身免疫性疾病的候选新药。