目的：探讨MDA-MB-231细胞经无血清培养富集三阴性乳腺癌干细胞。方法：将MDA-MB-231乳腺癌细胞进行微球体培养，取培养第7-9天的微球体,判断干细胞富集的程度；比较不同细胞浓度对癌球细胞成球率影响；干细胞表型CD44+CD24-/low流式细胞仪的测定; Western blot法分析癌球与贴壁细胞CXCR4蛋白表达；单个癌球细胞再成球能力；观察癌球与贴壁细胞集落形成。结果：（1).在含20ng/ml EGF,10ng/ml bFGF,2%b27无血清培养基中可培养三阴性乳腺癌癌球，1*104/ml、2*104/ml、3*104/ml、4*104/ml、5*104/ml细胞浓度癌球细胞成球率分别为（5.61±0.02）%、（3.23±0.54）%、（2.28±0.48）%、（1.05±0.13）%、（0.91±0.01）%，组间比较差异有统计学意义，P值均＜0.05。（2).贴壁MDA-MB-231细胞与癌球细胞CD44+CD24-/low含量分别为（38.54±2.00）%VS(66.35±2.06）%，差异有统计学意义，P=0.003。（3).癌球细胞CXCR4蛋白表达高于贴壁MDA-MB-231细胞，灰度扫描分析差异有统计学意义，P=0.03。（4).单个癌球细胞具有再成球能力。（5).软琼脂糖集落形成能力癌球需200个细胞即可见集落形成，而贴壁细胞需1000个MDA-MB-231细胞。结论：1.通过无血清培养可以富集三阴性乳腺癌干细胞，低细胞密度有利于癌球形成。2.癌球中CD44+CD24-/low含量高于贴壁MDA-MB-231细胞。3.CXCR4在癌球中表达高于贴壁MDA-MB-231细胞。